&|&&|&&|&&|&
化学合成siRNA oligo
技术服务信息
生物在线声明：以上所展示的信息由企业自行提供，内容的真实性、准确性和合法性由发布企业负责。生物在线对此不承担任何保证责任。
供应商联系卡
上海吉玛制药技术有限公司
浦东张江哈雷路
所在区域：
技术服务详细描述
吉玛公司高品质的siRNA合成概况& 吉玛公司拥有处于国际领先水平的siRNA化学合成的全部核心技术，特别是普通和修饰的siRNA&oligo合成技术、核酸荧光标记技术、多种核酸化学修饰技术等。siRNA产品不仅在中科院系统，如中科院生物物理所、中科院神经所、中科院生化所、中科院上海药物所；全国著名高校，如北京大学、清华大学、军事医学院、复旦大学；全国各大医院都取得了较好的声誉，而且产品正源源不断的销往美国、日本、台湾、新加坡、德国、瑞典、英国、法国、韩国及其它地方。 公司拥有进口的高通量合成仪和ABI394合成仪及多台HPLC纯化设备，采用国际市场的主流纯化方法－HPLC纯化技术，确保为客户提供与国外产品同等品质的产品。 吉玛公司生产规模 吉玛公司具有大规模合成siRNA&oligos,&shRNA&vector以及microRNA&inhibitor&和mimics的能力。吉玛公司目前单体生产能力达到每年20kg以上，并且还在扩大产能。siRNA每天可以生产50-100对，siRNAmicroRNA&mimics和microRNA&inhibitor都可以达到毫克级。吉玛的生产能力可以满足科研院所以及药物生产企业的需要。 化学合成siRNA&oligo特性 吉玛公司的RNA合成产品是经过反复优化和严格测试的，确保了产品质量的高度稳定。化学合成siRNA有操作简便、转染效率高、对细胞或者组织的毒副作用小、可大规模制备等优点，特别适用于基因靶位点不确定情况下，进行siRNA有效片段的筛选。本公司的专业技术人员热诚为您进行科学周到的序列设计服务。
吉玛公司 siRNA产品特性
siRNA oligo 合成是严格控制的流程和条件下完成的；
在ISO9000质量标准下生产；
产品经过分光光度计精确定量
HPLC纯化；全长双链siRNA含量&97%
标记和修饰
在3'和5'末端标记生物素、荧光素和***酸等更加方便监测siRNA的抑制特异基因表达的效果
19～23碱基/链
单链冻干粉；
退火的双链RNA的冻干粉
储存和稳定性
&吉玛公司建议在-20°C的环境中存贮，避免多次冷冻和化冻处理。吉玛公司保证在上述条件下寡核苷酸的稳定性可达到6个月，荧光标记的RNA必须避光保存
技术数据表
技术数据表与siRNA oligo一同交付， 包括名称、序列、浓度、OD和nmols的精确数量、纯化类型。
按照客户要求分装；
免费设计服务
1.5ml冻存管，包装后快递寄送
吉玛公司普通的siRNA oligo均由HPLC纯化，100％除去尚未配对的单链，价格便宜，质量上乘。研究者只需用包装盒内的通用缓冲溶液稀释后即可用本公司的RNAi－Mate转染试剂盒进行后续实验。
本公司可根据客户提供的每条基因设计四个靶点的siRNA。即可单独使用又可随意组合，以“siRNA Pool”形式提高抑制效率。
Custom siRNA
Custom siRNA
Custom siRNA
Custom siRNA
Custom siRNA
Custom siRNA
Custom siRNA
生物在线声明：以上所展示的信息由企业自行提供，内容的真实性、准确性和合法性由发布企业负责。生物在线对此不承担任何保证责任。
查看化学合成siRNA oligo 产品的用户还对以下产品感兴趣
&& &&[供应商：上海吉玛制药技术有限公司]
&& &&[供应商：上海吉玛制药技术有限公司]
&& &&[供应商：上海基康生物技术有限公司]
&& &&[供应商：上海吉玛制药技术有限公司]
&& &&[供应商：南京金斯瑞生物科技有限公司]
&& &&[供应商：上海吉玛制药技术有限公司]
&& &&[供应商：上海赛百盛基因技术有限公司]
&& &&[供应商：北京三博远志生物技术有限责任公司]
&& &&[供应商：北京红惠新医药科技有限公司]
&& &&[供应商：柏业贸易（上海）有限公司]
ADVERTISEMENT
找不到您所需的产品，发布求购试试？
请填写所需产品描述登录后留言
*联系电话：
*联系邮箱：
您现在选择匿名登录，请谨慎以事实文明留言评价，如果需要举报，请点击顶部右上角的“举报纠错”。 上传我的文档
 下载
 收藏
该文档贡献者很忙，什么也没留下。
 下载此文档
正在努力加载中...
cripto基因siRNA化学合成和对结肠癌细胞生物学行为的影响
下载积分：2100
内容提示：cripto基因siRNA化学合成和对结肠癌细胞生物学行为的影响
文档格式：PDF|
浏览次数：0|
上传日期： 01:55:08|
文档星级：
全文阅读已结束，如果下载本文需要使用
 2100 积分
下载此文档
该用户还上传了这些文档
cripto基因siRNA化学合成和对结肠癌细胞生物学行为的
关注微信公众号siRNA和shRNA:通过基因沉默抑制蛋白表达的工具
siRNA和shRNA:通过基因沉默抑制蛋白表达的工具
Erin P O’Keefe (erinisok at gmail dot com)
Princeton University, United States
潘海建 (ouchappy at sjtu dot edu dot cn)
上海， 中国。
http://dx.doi.org/10..3.197
更新 : ; 原始版 :
实验材料和方法
A comprehensive review of siRNAs and shRNAs as tools for gene silencing.
RNA干扰（RNAi）是有效沉默或抑制目标基因表达的过程，该过程通过双链RNA（dsRNA）使得目标基因相应的mRNA选择性失活来实现的。RNA干扰由转运到细胞细胞质中的双链RNA激活。沉默机制可导致由小干扰RNA（siRNA）或短发夹RNA（shRNA）诱导实现靶mRNA的降解，或者通过小RNA（miRNA）诱导特定mRNA翻译的抑制。这篇综述将重点介绍shRNA和siRNA是如何导致蛋白质表达抑制的。通过几种蛋白的活性（下面讨论），通过短反义核酸（siRNA和shRNA序列）锁定细胞mRNA，从而实现其随后的降解。这反过来阻断了该蛋白的进一步表达/聚集，导致其水平的下降，最终实现抑制作用。 图 1. siRNA和shRNA结构。（A） siRNAs是短的RNA双链，在3‘端有两个碱基的游离。
（B） shRNA由正义链和反义链通过环状序列隔开共同组成。（C） shRNA 构建用于插入表达载体。源自 [,
调控途径的发现和组成元件
早在1984年人们就发现反义RNA能够抑制基因的表达。1993年，Nellen和Lichtenstein提出了一个模型来解释这个观察。然而，直到1998年，Fire等人发表了在线虫RNA干扰的结果，他们发现双链RNA在抑制基因表达方面实际上比单链RNA更有效。最终确定小RNA途径涉及的蛋白质组分有许多与RNA干扰途径一样。表一总结了RNA干扰机制的主要元件。它们包括锁定靶基因的双链RNA（siRNA或shRNA）、Dicer酶，Argonaute蛋白家族的蛋白质（具体来说是Ago-2）、Drosha、RISC、TRBP和PACT。术语 描述siRNA小干扰（siRNA），有在3’端有两个碱基的游离，可激活RNA干扰，通过与目标mRNA互补结合序列特异性地实现mRNA降解。shRNA短发夹RNA （shRNA） ，包含一个环结构，可加工成siRNA，也可通过与目标mRNA互补结合序列特异性地实现靶mRNA降解.Drosha是一种核糖核酸酶III的酶，可加工细胞核中的前体-miRNA和shRNA。Dicer核糖核酸酶III酶，能够将双链RNA加工成在3‘端有两个碱基游离的20-25 bp的siRNA。果蝇的Dicer-2能够剪切长的双链RNA，而Dicer-1对miRNA的加工有重要作用RISC最小RNA诱导沉默复合物（RISC） 包含Argonaute蛋白和相关的siRNA。也可能包含PACT、TRBP和Dicer。需要注意的是RISC的组成尚未能得到确切的描述。TRBPDicer剪切双链RNA以及随后转运给RISC的过程中需要PACT蛋白R（PKR）-激活蛋白（PACT）。Dicer和TRBP参与双链RNA剪切相关.Argonaute family of proteins和单链的RNA（siRNA）共同组装形成RISC。绑定21-35个核苷酸的RNA，包括miRNA和siRNA以及相关的靶mRNA，然后通过其内切核酸酶功能发挥剪切作用。剪切作用发生在反义链（引导链）RNA的第10th和第11th个核苷酸之间。表一：RNAi机制的主要组成元件。siRNA vs. shRNA作用机制
两个在RNAi途径的基因沉默中具有实质利害关系的是双链小干扰RNA（siRNA）和基于载体的短发夹RNA（shRNA）。虽然siRNA和shRNA（图1）都可用于蛋白沉默，但它们的作用机制有所不同（图2）。不管是长的双链RNA还是短的约21bp碱基对的双链都能够直接被转运到组织培养的细胞中（参见转运机制获取更多细节）。虽然有一些报道提到siRNA在转染细胞时是被转运到细胞核中的，但更普遍的看法是它们在细胞质中聚集。长的双链RNA与Dicer一起形成复合物，双链特异性的核糖核酸酶III能够将它们处理成带有两个游离碱基的长度为21-23nt的siRNA。随后这些siRNA片段与RISC结合，RISC由Argonaute-2 （Ago-2）、Dicer和TAR-RNA-结合蛋白（TRBP）组成。然后RNA的两条链分开，其中一条链从复合物上分离。5'端双链稳定性最低的那条链被选择出来，稳定的并入沉默复合物中。 图 2. RNAi介导的基因沉默机制。 在细胞核表达后，shRNA被Drosha加工然后由Exportin-5蛋白转运到细胞质中，在细胞质中它们与Dicer结合去除环状序列。在这一点上，它们与siRNA的加工方式（以短的双链形态导入细胞，然后被Dicer识别）相同。在与RISC结合并去掉其中一条RNA链后，它们识别mRNA占有互补序列，导致其降解。源自 [] 。
shRNA在转染/转导细胞的细胞核中的合成，形成发夹结构，茎区成对的反义和正义链与未配对的成环核苷酸连接在一起（图1b和1c）。通过与miRNA的加工相同的RNAi机制，shRNA被加工成siRNA。使用细菌或病毒载体，shRNA被导入靶细胞的细胞核内，在某些情况下，载体可以稳定地整合到基因组中。根据驱动表达的启动子的不同，shRNA可被RNA聚合酶II或者III催化转录。在被Exportin-5转运到细胞质之前，这些初始的前体结构需要首先用Drosha及其双链RNA结合伴侣DGCR8加工形成pre-shRNA。pre-shRNA随后被Dicer和TRBP/PACT酶切，去除发卡结构，产生在两个3‘末端带有两个游离碱基的20-25nt的双链siRNA。这一有活性的siRNA随后被整合到沉默复合物上去。一旦被整合到RISC后，shRNA和siRNA识别靶mRNA和降解的过程基本上是相同的。作为RISC的一部分，siRNA通过碱基互补配对以序列特异性的方式结合到靶mRNA，从而利用Ago-2的核酸酶H样活性裂解靶RNA的双链中心附近的磷酸骨架。某些生物的这个系统有一个有趣的特点，siRNA与靶mRNA的退火使siRNA作为引物，而靶mRNA作为依赖于RNA的RNA聚合酶的模板。这就合成出一个新的双链RNA，然后由Dicer酶加工，形成正反馈循环，增加了siRNA的量。应当指出的siRNA通常需要完全同源才能诱导降解。该过程图2中有阐述。人们对RISC发现靶mRNA的过程还没有很好的理解。然而，Ameres等的报告显示细胞mRNA的靶序列的亲近性影响了它的剪切。他们还指出，RISC不是作用于未折叠的RNA。他们提出了一个模型，在该模型中，RISC非特异性的方式通过随机扩散与单链RNA接触，5'末端碱基配对比3'末端更有效率。这似乎决定了RISC与靶mRNA的稳定结合。shRNA比siRNA的优势包括能够使用病毒载体进行转染，克服了某些类型的细胞不能转染的难题，能选择使用诱导型启动子控制shRNA表达，能够与报告基因共表达。此外，它们能减少脱靶效应（在下面进一步讨论）。一般方案
设计siRNA和shRNA
许多实验室已发表了用于转染的长双链RNA的合成方案。但是，每种方法的效力是依赖于整个系统的。此外，长双链RNA会激活先天免疫反应，导致细胞死亡。影响shRNA活性的因素，包括环结构，发夹结构热力学性质，二级结构以及周围序列。siRNA和shRNA之间进行选择时，要考虑的一个重要因素是实验时间的长短。siRNA在细胞中瞬时表达的，而shRNA可以通过病毒介导的转导保持稳定。siRNA/shRNA设计指导在主要RNAi产品制造商那里都能获得19-29个核苷酸的siRNA序列通常是最有效的。长于30个核苷酸可导致非特异性沉默。 识别的理想位点包括靶mRNA序列中的AA二核苷酸区和3'端19个核苷酸的位点。通常情况下，siRNA与3’端为dUdU或者dTdT的游离碱基的mRNA结合效率更高。较新的数据表明，其他种类的二核苷酸也可保持活性，但siRNA能够被核糖核酸酶在单链的G残基处裂解，因此应避免GG结构。由于mRNA往往高度折叠并于调控蛋白结合的，应该要在不同位点选择至少2-4个靶序列。避免设计含有4-6个poly（T）的序列，因为它会作为RNA合成酶III的终止信号。检查以确保您的siRNA序列与其他编码序列没有同源性。 序列中的G/C含量应该在35-55％之间。 公司/组织程序名称描述链接Thermo ScientificsiDESIGN方便使用的siRNA设计工具。允许选择siRNA识别的区域（5’或3’ UTR或ORF区），G/C百分比，可通过BLAST搜索序列。 Naito et al.siDirect根据核苷酸序列识别目标，提供了序列内的位置，可供选择双链的熔解温度，脱靶序列的不匹配的最小数目。 InvitrogenBLOCK-IT RNAi Designer在核算序列内识别siRNA, shRNA和miRNA目标。也可将siRNA序列转化为shRNA序列。 InvivoGensiRNA Wizard可搜索一段编码序列作为siRNA序列，可根据您的siRNA序列设计加扰序列和发夹插入。 IDTshRNA设计工具shRNA设计工具能允许您在四个环序列中选择或者输入一段定制序列，也可以指定5’端和3‘端的酶切位点。 Gene LinkshRNA设计工具shRNA设计工具能允许您在三个环序列中选择或者输入一段定制序列，也可以指定5’端和3‘端的酶切位点，设计GC含量和长度。 表二：siRNA和shRNA设计程序。shRNA应包含正义和反义序列（每个为19-21个核苷酸的长度）由环结构分隔，以及5'端AAAA的游离片段。设计环结构时，Ambion的科学家和其他人建议使用9 nt的空白间隔（TTCAAGAGA），而Invivogen在某些载体中采用了长度为7 nt的环（TCAAGAG），这可根据您的系统变化。3