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2450MHz电磁波对细胞转化及热休克蛋白的影响及其机理的研究.pdf 84页
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2450MHz电磁波对细胞转化及热休克蛋白的影响及其机理的研究
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hGSTs多态性基因型检测与验证、GSTPi表达细胞的建立和对镉细胞毒性的影响.pdf 80页
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hGSTs多态性基因型检测与验证、GSTPi表达细胞的建立和对镉细胞毒性的影响
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中山大学硕士学位论文hGSTs多态性基因型检测与验证、GSTPi表达细胞的建立及对镉细胞毒性的影响姓名：许广宁申请学位级别：硕士专业：卫生毒理学指导教师：杨杏芬孛出丈掌蘸圭学位沧文hGSTs多态'戆蘩辫型捡测与验诞、GSTPi袭这翻憝瓣建藏擞封糍翅穗爨释麴彩穗hGSTs多态性基因烈检测与验证、GSTPi表达细胞的建立及对镊纲胞毒性瓣影响研究象诲广宁导师杨杏芬教授孛蠢犬学公共繁惫攀浚广东省疾病预防控制中心中文摘要随着季±会的发攫和科学豹遴步，入类疾病谱发生了较大的变化，环境糊关性疾病逐步成为影响人类健康和寿命的主要痰瘸。遗传因索串基闲多态健是解释不冈个体闻发病差异性的重要理论依据之一。人谷胱甘肽硫转移酶(humanhGSTs)是一粪翅一个超基因家羧缡鹚瓣{{提我澍酶，其中|l族、0羧耪露族纂嚣新编码的相应酶瀑自在机体对外来化学物，尤其是致癌物的代谢过程中起着黧癸的佟用。现已涯实这三令蘩藏家装在人饕中露在蒸弱多惫爨蒙，GSTMl、GSTTl蘩毅多态瞧主要袁现为基因的部分或全部缺失，遮种缺必导致个体不能编码相应的酶蛋囱，引起外源化学物质在体内的代谢过程发生改黛。GSTPl基因多态性主鬻袋现为单个碱基突变，导致所编码靛酶豢密对一羧环境致癌麓在体肉豹徒落发警改变。箨族基因过庭袭遮与脖瘸药耱瓣|药性密甥棚关。因此，测定hGSTs不黼基因型在人群中的分毒频率鼹垒圈、科学地反映hGSTs猩入群健康中所起的佟稽的第一步，丽对多态馋分布测定络聚避行凇确性评佶和确证是广泛应用多态性分布频率的前提和关键。本研究第一部分旨谯通过PCR扩增秀检测霸善载俸宠麓联舍涎廖方法，对零{褰题缝纛煺PCR-RFLP方法撩溅瓣帮势榉零遘行验证实验。虽然GSTPl肇鑫多态镶每瓣瘸等援经癍懿发象关系逐不薅定，键磺囊袭袋在菱鬻增殖或成熟细胞中筇族基因活性很低，在不少肿瘸细胞中均有明显的基因扩增和表达水’本课瓢受广寐省巍然科学基金潮驮壤羁(编号：015甜2)爨助lf串出L火掌磺士攀链涂文hGS’强多态矬鏊鞫型稔裁每骚近、GSTPi表这细巍的建立及时镰绸戆毒睦豹影响平增高，并与肿瘸细胞的耐药性檑关。耐药性的获得可能与GSTPi畿鞫綮脂性细胞毒性药耪结合袋催亿蕤童接底物GSH与藿金属、紊魄予裁(魏活佳氧)进行辗合，增葫蘩水溶性促进药物排泄、清除活性氧自由基，从而降低抗肿瘤药物对肿瘸细胞的毒性作用蠢关。还霄磷究发瑗GSTPi豹表达爨可疆茨业纯攀致瘸秘争基丙爝酸强鬣瓣魏(GMA)诱导酶纲脆怒性转化。确切的人类致癌物(IA)。有荧镉的致癌作用，近年来在分子水平上展开了广泛的研究，涉及到DNA损伤、基因调节和细胞信号传导、细胞凋亡镣方面。越来越多的实验表明诱GSH-Px等抗氧化翔，可有效摧抗诵的致癌作用和细胞毒性。蒸予酷肖磷究结采，舔测在一定条件下，翔鬃蹭翱疆常缅腱中GST-Pi懿东平，裔可能在对抗和消除镉的致癌和细胞毒性中起重熨作用。本研究第二部分的工作是从细胞在jl申瘤预防中的作甩提供参考。研究方法一、hOS弧GSTMl、T1、PI多恣慷基因型检测与验诞GSTTl非缺失慕因型和GSTPl样本用于T载体克隆及测序。2、T载髂蠢隆及茶定：霹熬基因与零载俸连接菇，转馨入感受态缀藏DH5ct扩缮、撬纯质粒。以质糠DNA为模投，通过PCR扩增和限制性酶切鉴定T载体克隧是否成功。3、测序：将含肖目的片段的质粒DNA双向测序，戳攘定目的片段怒否插入T载体及确定其糕凶型。4、两静方法擎竣溯结果院较：将本磷究焉PCR扩增及T载俸竞陵、溺净方法猃测结栗与本课题缀用PCR-RFLP检测方法聪褥结果搁眈较，了解本课题缎戆立的鏊瀚多态蛙梭测反应体系的凇确性、可纛髋及可熬复性。ltl率出丈学矮圭学位论文hGSTs雾态挂蒸毽鼙检测号验涟、GSTPi麓这绷整数建它及瓣镛缨艇簿性豹彰璃二、GSTPi对镄缀臆霉性影确鹩实验研究缨庭增建凌麓，了麟锈对N疆3鹊缯憨生长{}枣裁终舔熬爨爨，效应关系秘辩润．效应关系，为进一步研究铺对GSTPi表达的NIH3T3．Pi细胞生长摊制律用寻找染瓣剂量等依据。2、GSTPieDNA绿萋荧筏震基嚣熏缀接零瓣该蓥因j挚捌搔入绿煎荧巍蛋自焱这载傣，秘建GSTPi光蛋白真榱滚达载体，用于转潦细胞。eDNA表达载俸霉入NIH3T33、GSTPi袋遮缁藏建立：应露瀛核缁熬转染方法将GS种i细胞，获得GSTPi表达细胞。经荧光擞微镜观察转染细胞、免疫组化检测GSTPi表达戆凝。关系帮时嬲，效应荧系，探讨GSTPi对镊细胞毒性影响。实验结聚一、hGSTsGSTMl、T1、P1彩恣性撩因型检测GSTMl检测、1、GSTMl、T1、P1多态性基斛型的梭测：本次试验对30例样本进行Y失型16倒，占53％；GSTPl众部成驹扩增。络采与本谦题缝原先检测静结暴耱～致。2、pGEM．T-GST载体
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氨基酸对映异构体的电化学发光识别.pdf66页
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大连理工大学
硕士学位论文
氨基酸对映异构体的电化学发光识别
姓名:徐松云
申请学位级别:硕士
专业:应用化学
指导教师:赵常志
夫连理大学硕士论文
本文利用电化学发光的优势,综合电分析化学,光化学和立体化学等学科的原理
和技术,实现了氨基酸对映体不经拆分的直接检测,发展了一种识别手性分子的新方
本文分别采用三种不同的方法对氨基酸对映异构体的电化学发光识别进行了考察
发现氨基酸的对映异构体与溶液中的电化学发光试剂一三联吡啶合钌有不同
的相互作用,能产生不同的电化学发光光谱;对.构型氨基酸的电化学发光强度大于
构型的电化学发光强度;脯氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸的最大差异电化学发光强度的
电位分别为.、.、.。在一定的氨基酸浓度和一定的激发电位下,随着氨
基酸对映异构体中构型比率的改变,电化学发光强度呈线性变化关系;推导出检测氨
基酸对映异构体的计算公式;用库仑法验证了氨基酸对映体与三联吡啶合钌电化学发
光反应的立体选择性。
以壳聚糖包埋三联吡啶合/修饰电极为工作电极,提高了电化学发光信号
的响应强度;发现对一氨基酸的电化学发光强度大于.氨基酸的电化学发光强度;分
别在.和.的激发电位时,对脯氨酸和苯丙氨酸的对映异构体的电化学发光
强度,有足够大的差异:电化学发光强度能随着氨基酸对映异构体中构型比率的变化
呈线性关系:测定了氨基酸样品的对映体浓度;并用库仑法验证了壳聚糖膜对氨基酸
对映异构体的立体选择性。
在壳聚糖包埋三联吡啶合钉,二氧化硅修饰复合电极上,分别键台上、一树胶
醛糖制备了电化学发光手性探针;使用型手性探针时,对一氨基酸的电化学发光强
度大于一氨基酸的电化学发光
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衰老的免疫学研究自然衰老的免疫系统变化及氧化应激对免疫系统的影响.pdf 98页
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衰老的免疫学研究自然衰老的免疫系统变化及氧化应激对免疫系统的影响
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中国协和医科大学博士学位论文衰老的免疫学研究:自然衰老的免疫系统变化和氧化应激对免疫系统的影响姓名：冯仁田申请学位级别：博士专业：免疫学指导教师：何维;林嘉友中国协和医科大学博士学位论文英文缩略谣英文缩略语APCcell抗原呈递细胞presentingAntigenBSABovineserumalbumin牛敷清鑫蝥鑫CATCatalase过氧化氢酶CDClusterofdifferentiation分化簇CiCurie屠厦ConAConcanavalin刀飘蛋白Countminute每分锋计数CPmperCTLTCytotoxic细胞毒性T淋巴细胞lymphocytedday天DABDiaminobenzidine二氨基联苯胺DCDendriticcell树突状细胞转瀚矗benez(a)anthracene二攀基苯葱?，12一dimethylDNAdsDNADouble—stranded双链DNAEBEthidiumbromide溪纯乙锭EDTAdeaminetetraceticacid乙二胺四乙酸EthyleneinkedELISAimmunosorbent酶联免疫吸附试验Enzyme-IassayFACSFluorescenceactivatedcellsorter荧巍激活缎怒势选搜FetalfFCScalserum胎牛血清FITeFluoresceinisothiocyanate异虢氰酸荧光素GSTGlutathione—S～transferase谷觥营肽S一转移酶GSHGlutathione谷胱苷肽HEandHematoxylineosin(stain)苏零糖一伊红(染魏)HEPESN一2一羟乙慕哌嗪一Ⅳ一2一N一2一Hydroxyethylpiperazine—N’一2-ethanesulfoniCacid乙磺酸挂}hour夺辩3n—TdR3H-thymidine氚标记胸腺嘧啶核瞥IFNInterferon干扰索in兔癀球蛋自IgImmunoglobulILInterleukin白细胞介索KbKilobase手溅蓥KDKilodatlon千邋尔顿activatedLAKLymphokinekiller淋巴因子激活的杀伤细胞§一ME转一瑶ere8ptoethanoi登一豸《基Zj静mlnminute分钟骥{eMajorhistocompatibilitycomplex圭簧浆绞穗褰建笈会葵申瘸协秘医辩大学博士举经论文英文绾硌语2赫NeMononuclearcell荦个核细胞MTT二甲基偶氮唑蓝3一(4，5-dimethylthiazol一2一y1)2。iumtetrazol5一diphenytbromideNKNaturalkiller自然杀伤(绷胞)ODdensity光密度Optical8-OH嚣8一羧蓦瓣戴鸟嗓冷援营8-Hydroxy—’2——deoxyguanosineOVAOvalbumin，chicken鸡卵清白蛋白PBLblood於惩矗漤巴缨艇PeripherallymphocytePBSPhos_Dhate—bufferedsa!ine磷酸盐缓、渖液PEPhycOerythrin藻红蛋白p王Propidiu藏iodide碘缇丙捷POPOP1，4～双一(2，-C5’苯熬恶1，4-di一(2’一C5’-phenyloxazolyl)一benzene唑)苯PPO2，5-琏ip珏enyloxa鬈。王e2，5二苯基慧蝰RNaseRibonuclease核糖核酸酶R8SReactiveoxygenspecies活瞧氯按震Roundminuterpmper每分钟转数SA-PEStreptavidin-PE藻爨蛋白标记的链襟亲和素SA—”FITCStreptavidin—’FITC异硫氰酸荧光素标记的链霉亲秘素cel1factorSCFStem予缩胞嚣予SODdismutaseSuperoxide超氯化物歧化酶SDSSodiumsulfate十二烧基磺酸镳dodeeyITCRTcelIT纲胞受体receptorThThelperT辅助(细胞)鞲FTumornecrosisfactor辩瘤繇瑟嚣予TriSTrishydroxymethylaminomethane三羟甲基氨潦甲烷Wweek鼹中国沦和医科大学博士学位论文摘要中文摘要众所周知，机体衰老或老化传有免疫系统退化和活性氧(ROS)产生增加。农众多衰老学说中，氧傀斑激学说(自由旗学说)和免疫学说一赢占有重骚地位。裁自由基(现已归入“活性氧”的概念中)的产生可由体内外因綮所弓l超，一般赣凝下，活毪氧萄棱税体蠹深槛瀚抗氧健防护俸系所捧制或淬灭。若自翻基产生过多，或机体的清除机制及其损伤修复功能下降的话，就可对生物大分子造成严熬氧往攒伤，形残多稳“氧纯串窝俸”
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大剂量沐舒坦对急性呼吸窘迫综合征患者呼吸力学、细胞因子、氧合和抗氧化能力影响.pdf 43页
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!!!型塑叁堂型鲨堕堂堕———————』生上兰!!!鲨大剂量沐舒坦对急性呼吸窘迫综合征患者呼吸力学、细胞因子、氧合和抗氧化能力的影响研究生张清导师袁世荧中文摘要目的：ARDS是由各种病因引起的，以顽固性低氧血症为特点的临床综合征。肺泡表面活性物质严重不足是其最早的病理生理改变之一，引起小气道陷闭、肺不张及功能残气量减少等一系列病理生理紊乱，造成肺顺应性下降及氧合障碍。随着对其发病机制的深入研究，发现大量氧自由基和炎症介质在其发生发展过程中起重要的作用。因而，增强ARDS患者的抗氧化和抗炎能力，刺激内源性肺泡表面活性物质分泌及合成，可能是一种可行的治疗途径。沐舒坦是一种较新的黏液溶解剂，主要作为祛痰剂以小剂量用于慢性支气管炎、慢性阻塞性肺病和防治外科术后肺部并发症等的治疗。近年来发现沐舒坦可促进肺泡表面活性物质(PS)的分泌及合成，而且大剂量应用具有抗氧化和抗炎特性。本研究观察大剂量沐舒坦对ARDS患者呼吸力学、细胞因子、氧合和抗氧化能力的影响，为其用于ARDS的治疗提供临床依据。方法：选择ARDS患者42例，随机分成对照组(A组，n-20)和实验组1扛中利找人学川济医学院坝l。学位论文fB组，n=22)。A组给予单纯生理盐水500ml静脉滴注，B组给予沐舒坦20mg·k一+生理赫水500ml静脉滴注，共7天。分别在治疗前、治疗5天后及治疗7天后同一时间测其血气、血清SOD活力及细胞因子(IL-1(PPE。K、RAw和CL)及肺损伤评分等的变化。比较两组患者各项氧合及呼吸力学指标、肺损伤评分、血清SOD活力及细胞因子的变化和差异。／结果：应用大剂量沐舒坦后，ARDS患者(1)动脉血气Pa02、Sa02及Pa02／Fi02显著高于对照组(．p&o05或P&O．O】)。(2)肺顺应性(CL)显著疗前明显降低(尸&O．os)，且治疗组患者肺损伤评分明显低于对照组(P．(O．05)。(4)血清SOD活力比治疗前明显升高CP&O．05)，且治疗组明显高于对照组(P&0．05)。(5)血清促炎性细胞因子IL—lB、IL一6、IL一8、TNF—Q和GM—CSF比治疗前明显降低(P&O．05)，且治疗组明显低于对照组(P&O．05)。而抑炎性细胞因子II一0比治疗前明显升高(尸&o．05)，且治疗组明显高于对照组cP&0．osN结论y大剂量沐舒坦能增强ARDS患者的抗氧化能力，抑制其促炎性细胞因子释放，而刺激抑炎性细胞因子释放，具有明显的抗炎能力，可以显著改善ARDS患者的氧合及呼吸力学等指标，有利于ARDS患者呼吸功能的恢复。关键词沐舒坦；急性呼吸窘迫综合征；呼吸力学；超氧化物歧化酶细胞因子竺主型垫查兰型鲨堕堂堕——————————』生坚兰!!!!兰英文摘要ontheambroxolTheeffectsofdoserespiratoryhighmechanics，serumandanti—oxidantcytokines，oxygenationofwithARDSactivitypatientsZHANGPostgraduate：QingTutor：YUANShiyingAbstractARDSisaclinicalidentifiedwithcausedobjectivesyndromehypoxemiaofsurfaetantisoneofearliestvariousalveolarthebyreasons．DeficiencyofARDS．WithinthepathophysiologicalchangesprofoundstudyofhasfoundthatfreeradicalsandARDS，itoxygencytokinespathogenesisanenhancementofanti·oxidantimportantplayrole．Consequently，therapeuticandde．neemechanismsinARDSseemsarationalanti—inflammatoryjsausedwithlowinthemucolyticdoseapproach．AmbroxolnormallyandtreatmentofchronicCOPDandprophylaxisbronchitis，bronchopulmonaryafterstudieshavecomplicationssurgery．Recentdemonstratedthatdoseambroxolhighcanstimulatesurfactantandsynthesisithasanti-oxidantandsecretion，andanti—inflammatorythisproperties
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