哪个公司卖的细胞株与细胞系的区别系比较好

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CRISPR做细胞系敲入哪家公司做的比较好?
最近老板心血来潮想用CRISPR做细胞系敲入,实验室基础太差所以决定一方面自己摸索,一方面找公司做,求稳。
联系了几家公司,结果都是不包KI结果,只对已经完成的部分负责,项目有可能因为做不下去而中止。
其中一家公司的产品经理更是直接说“现在国内就没有包结果的细胞系KI”……
想问一下大家有没有找公司做过基于CRISPR的细胞系KI?如果有的话,哪家比较靠谱?
或者国内有哪家实验室做的比较在行?
我们实验室主要是做胸部恶性肿瘤的,所以用的食管癌的KYSE系列的细胞系。
主要做的最近发现的几个比较火的位点,FBXW2、FAT、AJUBA之类的。
想请问report line是什么?
报告基因,你们选择什么作为报告基因,GFP适不适合?肿瘤细胞系没坐过,不知道好不好做,一般来说能稳定扩增,能形成克隆,用药筛方式是很好做的,干细胞里面做基本不是问题,你的这个细胞系可能公司没接触,不了解所以有点麻烦。在iPSC里面一般先转染,然后药筛。接着铺单克隆,单克隆长到一定细胞量后划出一部分鉴定,阳性克隆保留。你要做这个细胞系,转染不成问题,iPSC算是最难转染层级的细胞了,一般lonza核转仪电转。富集过程应该也不是问题,一般是在整合片段里面加一个药筛表达子,比如用housekeeping gene 的启动子PGK(糖酵解中的酶的启动子,甘油磷酸激酶)驱动的puromycin 。后面的就不知道你们细胞系该怎么继续了,
多谢大神指点!
我初步的想法也跟你差不多,转染后药物筛选,活着的细胞形成单克隆,然后鉴定有没有成功进行基因组编辑。
实验的原理我也看过一部分文献,奈何实验室实在是没有CRISPR的基础……很多参数、条件,我们其实跟公司一样,也要现摸索。
你们是自己实验室在做?还是有过合作的公司?
公司做hipsc的,平台还算成熟,可以交流。如果没时间可以给你联系方式。如果只是crispr,可以直接私聊我,我可以给一些我们公司经验
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随时随地聊科研什么是细胞株?什么是细胞系?如何购买细胞株?_机械百科_中国百科网
什么是细胞株?什么是细胞系?如何购买细胞株?
    &细胞株(Cell&Strain):通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株(Cell&Strain),也就是说,细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。&原代培养物经首次传代成功后即为细胞系(cell&line),&由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。如果不能继续传代,或传代次数有限,&可称为有限细胞系(finite&cell&line),&如可以连续培养,&则称为连续细胞系(continuous&cell&line),&培养50代以上并无限培养下去。&所以细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养细胞。从培养代数来讲,可培养到40-50代。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。如果不能继续传代或传代数有限,称为有限细胞株(finitecell&strain);如果可以连续传代,称为连续细胞株(continuous&cell&strain)。对于人类肿瘤细胞,在体外培养半年以上,生长稳定的并连续传代的即可称为连续性株或系。如何购买细胞株?&一、国内细胞株选购指南:先打电话问一下,所买的细胞是用的什么培养基以及什么血清,及早先准备好。最好也用同样的培养基。不要忘了问一些培养所买细胞的一些生长特性,包括大约多少天可以传代等等吧。必要时所要所买细胞的一些技术资料。二、由于现在国内的细胞库资料不是很足,再加上所做的实验项目非常重要,有些客户需要购买国外细胞株,购买国外细胞株需要考虑的因素有如下几点:1、细胞株的生物等级,由于有些细胞株及菌株属于管制品,所以从国外购货比较麻烦。2、在购买国外细胞株时,需交待国外加比较多的干冰(一般在13公斤以上,采用比较密封的泡沫盒加套纸箱。3、报关时尽量提供比较充足的证明材料,以免担搁时间而导致干冰挥发完细胞株死亡,甚至于被退回给发货人。4、如果通过国外细胞株在国内的代理商购买的话,合同中需注明以下一些内容:a.明确的到货时间,这个时间需注明的是工作日,还是普通日。b.采用什么样的运输方法?c.如果属于技术外的因素而细胞株无法培养活,供方需负什么样的责任?d.细胞株的详细资料,以及细胞株的代数,其中,ATCC的细胞株一般都在几十代,这个需要与国外确认,IST-Banca可与他们的代理商联系索取详细资料!e.需在合同中注明原装进口,避免相关公司鱼龙浑杂,从国外购买回一株细胞株,经过培养传代后,同时供应给几个人;一般国外进口的细胞株都会有原装的冻存管,而且每一支冻存管上都会有批号,而且每次的批号都不一样。
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