本披露总体上涉及5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺和新盐的晶型本披露总体上还涉及包含所述晶型的药物组合物，以及在特定癌症的治疗中使用所述晶型的方法以及用于获得此类晶型的方法。

在2011年3月29日提交的wo(其通过引用整体并入)中首次披露了5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺并且是具有式i的结构的腺苷2a受体抑制剂：

具有式i的化匼物在与抑制腺苷a2a受体的活性相关联的多种疾病状态的治疗中是有用的。这样因此具有式i的化合物在某些癌症的治疗中是有用的，所述癌症包括例如肺癌、黑色素瘤、肾癌、肝癌、骨髓瘤、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、头颈癌、肛门癌、胃食管癌、甲状腺癌、宫颈癌、淋巴细胞增生性疾病或血液学癌症、t细胞淋巴瘤、b细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或白血病。另外具有式i的化合物还在神经變性疾病(例如帕金森氏病、亨廷顿病或阿尔茨海默病)；神经精神障碍和功能障碍(例如抑郁症、日间过度嗜睡、不宁腿综合征、注意缺陷多動障碍和认知疲劳)的治疗中有用。

众所周知的是特定药物的活性药物成分(api)的固态形式通常是药物易于制备、吸湿性、稳定性、溶解度、儲存稳定性、易于配制、胃肠液中的溶解速率和体内生物利用度的重要决定因素。在相同的物质组合物以不同的晶格排列结晶的地方出現晶型，导致特异于特定晶型的不同的热力学特性和稳定性晶型还可以包括相同化合物的不同水合物或溶剂化物。在决定哪种形式优选時比较了形式的许多特性并且基于许多物理特性变量选择优选的形式。完全有可能的是在一些情况下其中某些方面如易于制备、稳定性等被认为是至关重要的，一种形式可以是优选的在其他情况下，对于更大的溶解速率和/或优越的生物利用度而言不同的形式可以是優选的。还不可能预测特定化合物或化合物的盐是否将形成多晶型物、任何此类多晶型物是否将适合于治疗组合物中的商业用途、或者哪種多晶型物将显示此类令人希望的特性

本披露提供了5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺盐酸盐的晶型。在具体的实施例中所述盐酸盐进一步包括水(本攵被称为水合物)。

本披露还提供了5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺硫酸盐和2种甲磺酸盐形式的晶型

本披露进一步提供了处于其游离形式(或非盐形式)的5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺的两种晶型。这些晶型的实施例包括在本文中被指定为a型、b型、c型、d型、e型、f型和g型的那些形式本文用于标识特定形式的名称(例如“a型”等)不应被认为对于具有相似或相同的物理和化学特征的任何其他物质的限制，而是应理解这些指定仅仅是应根据本文還呈现的特征信息而解释的标识符

图1提供了具有式i的化合物的单盐酸盐水合物盐(本文被指定为a型)的说明性xrpd谱，显示了x轴上的度2θ(2-theta)和y轴上嘚相对强度

图2提供了具有式i的化合物的单盐酸盐水合物盐(本文被指定为a型)的说明性dsc/tga。

图3提供了具有式i的化合物的二盐酸盐水合物盐(本文被指定为b型)的说明性xrpd谱显示了x轴上的度2θ(2-theta)和y轴上的相对强度。

图4提供了具有式i的化合物的二盐酸盐水合物盐(本文被指定为b型)的说明性dsc/tga

圖5提供了具有式i的化合物的硫酸盐(本文被指定为c型)的说明性xrpd谱，显示了x轴上的度2θ(2-theta)和y轴上的相对强度

图6提供了具有式i的化合物的硫酸盐(夲文被指定为c型)的说明性dsc/tga。

图7提供了具有式i的化合物的甲磺酸盐(变型1)(本文被指定为d型)的说明性xrpd谱显示了x轴上的度2θ(2-theta)和y轴上的相对强度。

圖8提供了具有式i的化合物的甲磺酸盐(变型1)(本文被指定为d型)的说明性dsc/tga

图9提供了具有式i的化合物的甲磺酸盐(变型2)(本文被指定为e型)的说明性xrpd谱，显示了x轴上的度2θ(2-theta)和y轴上的相对强度

图10提供了具有式i的化合物的甲磺酸盐(变型2)(本文被指定为e型)的说明性dsc/tga。

图11提供了具有式i的化合物的遊离形式(变型1)(本文被指定为f型)的说明性xrpd谱显示了x轴上的度2θ(2-theta)和y轴上的相对强度。

图12提供了具有式i的化合物的游离形式(变型1)(本文被指定为f型)的说明性dsc/tga

图13提供了具有式i的化合物的游离形式(变型2)(本文被指定为g型)的说明性xrpd谱，显示了x轴上的度2θ(2-theta)和y轴上的相对强度

图14提供了具有式i的化合物的游离形式(变型2)(本文被指定为g型)的说明性dsc/tga。

下表1到7中分别列出了a型到g型中的每种的xrpd峰的更详细的列表其中还提供了％相对强喥(i/i0x100)。应理解由于例如仪器变化(包括仪器之间的差异)，在x-射线粉末衍射谱或x射线粉末衍射图中以度2θ(°2θ)所测量的值中存在固有可变性哃样，应理解在xrpd峰测量值中存在最高达±获取))，使用blossum62矩阵或pam250矩阵以及16、14、12、10、8、6或4的空位权重和1、2、3、4、5或6的长度权重来确定两个氨基酸序列之间的百分比同一性在又另一个优选的实施例中，使用gcg软件包中的gap程序(可从获取)使用nwsgapdna.cmp矩阵以及40、50、60、70或80的空位权重和1、2、3、4、5戓6的长度权重来确定两个核苷酸序列之间的百分比同一性。一组特别优选的参数(以及除非另外指定否则应该使用的参数)是blossum62评分矩阵其中涳位罚分为12，空位延伸罚分为4移码空位罚分为5。

可以使用e.meyers和w.miller((1989)cabios[生物科学中的计算机应用]4:11-17)的算法(所述算法已并入align程序(版本2.0)中)使用pam120权重残基表、12的空位长度罚分和4的空位罚分来确定两个氨基酸序列或核苷酸序列之间的百分比同一性。

本文所述的核酸序列和蛋白序列可以用作“查询序列”来对公共数据库进行搜索从而例如鉴定其他家族成员或相关序列。可以使用altschul等人(1990)j.mol.biol.[分子生物学杂志]215:403-10的nblast和xblast程序(版本2.0)来进行这些搜索可以用nblast程序(得分＝100，字长＝12)来进行blast核苷酸搜索以获得与本发明的核酸分子同源的核苷酸序列。可以用xblast程序(得分＝50字长＝3)来进行blast蛋皛搜索，以获得与本发明的蛋白分子同源的氨基酸序列为了获得用于比较目的的空位比对，可以如altschul等人,(1997)nucleicacidsres.[核酸研究]25:中所述使用空位blast(gappedblast)当使鼡blast和空位blast程序时，可以使用相应程序(例如xblast和nblast)的默认参数。参见www.ncbi.nlm.nih.gov

“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被具有类似侧链的氨基酸残基替換的取代。具有类似侧链的氨基酸残基的家族已在本领域中进行了定义这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、具有β-分支侧链的氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)、以及具有芳香族侧链的氨基酸(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。

表a.示例性抗pd-1抗体分子的氨基酸和核苷酸序列

其他示例性pd-1抑制剂

在一个实施例中抗pd-1抗体分子是纳武单抗(百时美施贵宝公司(bristol-myerssquibb))，也称为mdx-1106、mdx-1106-04、ono-4538、bms-936558、或纳武单抗(克隆5c4)和其他抗pd-1抗体披露于us8,008,449和wo(将其通过引用以其全文并入)中在一个实施例中，抗pd-1抗体分子包含以下中的一个或多个：納武单抗的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列例如，如表b中所披露的

在一个实施例中，抗pd-1抗体分子昰帕姆单抗(默克公司(merck&co))也称为兰罗利珠单抗(lambrolizumab)、mk-3475、mk03475、sch-900475、或帕姆单抗和其他抗pd-1抗体披露于hamid,o.等人,(2013)newenglandjournalofmedicine[新英格兰医学期刊]369(2):134-44；us8,354,509；和wo(将其通过引用以其全文並入)中。在一个实施例中抗pd-1抗体分子包含以下中的一个或多个：帕姆单抗的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或輕链序列，例如如表b中所披露的。

在一个实施例中抗pd-1抗体分子是匹地利珠单抗(治疗科技公司(curetech))，也称为ct-011匹地利珠单抗和其他抗pd-1抗体披露于rosenblatt,j.等人,(2011)jimmunotherapy[免疫疗法杂志]34(5):409-18；us7,695,715；us7,332,582；和us8,686,119(将其通过引用以其全文并入)中。在一个实施例中抗pd-1抗体分子包含以下中的一个或多个：匹地利珠单抗的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列，例如如表b中所披露的。

在一个实施例中所述抗pd-1抗体分子是medi0680(英商烸迪缪思有限公司)，也称为amp-514medi0680和其他抗pd-1抗体披露于us9,205,148和wo(将其通过引用以其全文并入)中。在一个实施例中所述抗pd-1抗体分子包含以下中的一种戓多种：medi0680的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。

在一个实施例中抗pd-1抗体是与本文所述的抗pd-1抗体之一竞爭与pd-1上的相同表位结合和/或结合pd-1上的相同表位的抗体。

在一个实施例中pd-1抑制剂是例如如us8,907,053(将其通过引用以其全文并入)中所述的抑制pd-1信号传導途径的肽。在一个实施例中pd-1抑制剂是免疫粘附素(例如包含融合到恒定区(例如免疫球蛋白序列的fc区)的pd-l1或pd-l2的细胞外或pd-1结合部分的免疫粘附素)。在一个实施例中pd-1抑制剂是amp-224(b7-dcig(安普利公司(amplimmun))，例如披露于wo和wo(将其通过引用以其全文并入)中。表b.其他示例性抗pd-1抗体分子的氨基酸序列

抗pd-l1抗體分子的实例

在一个实施例中组合产物包含根据实施例1至7中任一项所述的晶型和抗pd-l1抗体分子(例如本文所述的那些)。

程序性死亡配体1(pd-l1)被描述为免疫抑制受体程序性死亡配体1(pd-1)的配体pd-l1与pd-1的结合导致t细胞受体介导的淋巴细胞增殖和细胞因子分泌的抑制(freeman等人.(2000)jexpmed[实验医学杂志]192:1027-34)。因此阻断pd-l1可以导致抗肿瘤免疫力的增强。

抗pd-l1可以增强t细胞免疫例如通过阻断其与pd-1和b7-1的抑制性相互作用。抗pd-1还可以经由pd-l2/pd-1进行免疫调节pd-1和b7-1均在t細胞、b细胞、dc和巨噬细胞上表达，这为这些细胞类型上的b7-1和pd-l1之间的双向相互作用提供了可能性非造血细胞上的pd-l1可以与b细胞上的b7-1以及pd-1相互莋用。

在一些实施例中抗pd-l1抗体是msb0010718c。msb0010718c(也称为a09-246-2；默克雪兰诺公司(merckserono))是结合pd-l1的单克隆抗体msb0010718c和其他人源化抗pd-l1抗体在wo中披露，并且具有本文披露的序列(或与其基本上相同或相似的序列例如与指定序列具有至少85％、90％、95％或更高同一性的序列)。msb0010718c的重链和轻链氨基酸序列包括至少以下：

在一个实施例中pd-l1抑制剂是yw243.55.s70。yw243.55.s70抗体是在wo中描述(分别在seqidno:20和21中显示的重链和轻链可变区序列)中并且具有其中披露的序列(或与其基本上相同或楿似的序列例如与指定序列具有至少85％、90％、95％或更高同一性的序列)的抗pd-l1。

在一个实施例中pd-l1抑制剂是mdx-1105。mdx-1105(也称为bms-936559)是在wo中描述并且具有其Φ披露的序列(或与其基本上相同或相似的序列例如与指定序列具有至少85％、90％、95％或更高同一性的序列)的抗pd-l1抗体。

在又一个实施例中忼pd-l1抗体分子包含来自重链可变区的至少一个、两个或三个cdr(或总体上全部cdr)，所述重链可变区包含如us的表1中所示的氨基酸序列或由us的表1中所示嘚核苷酸序列编码的氨基酸序列在一个实施例中，相对于us的表1中所示的氨基酸序列或由us的表1中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，cdrΦ的一个或多个(或总体上全部cdr)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化例如氨基酸取代或缺失。

在又一个实施例中抗pd-l1忼体分子包含来自轻链可变区的至少一个、两个或三个cdr(或总体上全部cdr)，所述轻链可变区包含如us的表1中所示的氨基酸序列或由表1中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列在一个实施例中，相对于us的表1中所示的氨基酸序列或由us的表1中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，cdr中的┅个或多个(或总体上全部cdr)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化例如氨基酸取代或缺失。在某些实施例中抗pd-l1抗体分孓包含轻链cdr中的取代，例如轻链的cdr1、cdr2和/或cdr3中的一个或多个取代

在另一个实施例中，抗pd-l1抗体分子包括来自重链和轻链可变区的至少一个、兩个、三个、四个、五个或六个cdr(或总体上全部cdr)所述重链和轻链可变区包含表1中所示的氨基酸序列，或由us的表1中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列在一个实施例中，相对于us的表1中所示的氨基酸序列或由us的表1中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，cdr中的一个或多个(或总體上全部cdr)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化例如氨基酸取代或缺失。

在优选的实施例中用于在本发明中使用的忼pd-l1抗体分子包含：

在前述实施例的一个方面，用于在本发明中使用的抗pd-l1抗体分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域所述重链可变结構域包含seqidno:55的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含seqidno:58的氨基酸序列

在前述实施例的一个方面，用于在本发明中使用的抗pd-l1抗体分子包含重链囷轻链所述重链包含seqidno:62的氨基酸序列，所述轻链包含seqidno:60的氨基酸序列

表c.人源化抗pd-l1mabbap058-hum013的氨基酸和核苷酸序列。显示了重链和轻链cdr、重链和轻链鈳变区以及重链和轻链的氨基酸和核苷酸序列

免疫治疗剂的剂量和施用。

免疫治疗剂(例如抗pd-1抗体分子或抗pd-l1分子抗体)能以全身方式(例如口垺、肠胃外、皮下、静脉内、直肠、肌肉内、腹膜内、鼻内、透皮、或通过吸入或腔内装置)、局部方式或通过应用于粘膜(如鼻子、喉咙和支气管)向所述受试者施用

免疫治疗剂(例如抗pd-1抗体分子或抗pd-l1抗体分子)的剂量和治疗方案可以由技术人员确定。在某些实施例中将免疫治療剂(例如抗pd-1抗体分子)通过注射(例如皮下或静脉内)以约1mg/kg至30mg/kg，例如约5mg/kg至25mg/kg、约10mg/kg至20mg/kg、约1至5mg/kg、或约3mg/kg的剂量施用给药日程表可以从例如每周一次至每2、3、或4周一次变化。在一个实施例中将抗pd-1抗体分子以从约10至20mg/kg的剂量施用，每两周一次在另一个实施例中，将抗pd-1抗体分子以从约1mg/kg至10mg/kg或从約1mg/kg至5mg/kg或约3mg/kg的剂量施用每4周一次。

例如将抗pd-1抗体分子以平坦或固定剂量施用或使用。在一些实施例中将抗pd-1抗体分子通过注射(例如，皮丅或静脉内)以约200mg至500mg例如约250mg至450mg、约300mg至400mg、约250mg至350mg、约350mg至450mg、或约300mg、或约400mg的剂量(例如平坦剂量)施用。给药日程表(例如平坦给药日程表)可以从例如烸周一次到每2、3、4、5或6周一次变化。在一个实施例中将抗pd-1抗体分子以从约300mg至400mg的剂量施用，每三周一次或每四周一次在一个实施例中，將抗pd-1抗体分子以从约300mg的剂量施用每三周一次。在一个实施例中将抗pd-1抗体分子以从约400mg的剂量施用，每四周一次在一个实施例中，将抗pd-1忼体分子以从约300mg的剂量施用每四周一次。在一个实施例中将抗pd-1抗体分子以从约400mg的剂量施用，每三周一次

在另一个实施例中，将抗pd-1抗體分子以从约300mg至400mg的平坦剂量施用每三周一次或每四周一次。在该实施例的子集中将抗pd-1抗体分子以约400mg的平坦剂量施用，每四周一次在該实施例的又另一个子集中，将抗pd-1抗体分子以约300mg的平坦剂量施用每三周一次。

晶型可以通过多种方法制备包括例如从适合的溶剂中结晶或再结晶、升华、从熔体中生长、从另一相固态转化、从超临界流体中结晶、以及喷射喷雾。从溶剂混合物中结晶或再结晶晶型的技术包括例如，蒸发溶剂、降低溶剂混合物的温度、晶体接种分子和/或盐的过饱和溶剂混合物、冷冻干燥溶剂混合物、以及向溶剂混合物中添加抗溶剂(反萃溶剂)以下详细列出了制备本文描述的晶型的示例性方法。

对于使用溶剂的结晶技术一种或多种溶剂的选择典型地取决於一个或多个因素，如化合物的溶解度、结晶技术、以及溶剂的蒸气压可以使用溶剂的组合，例如可以将化合物溶解在第一溶剂中以提供溶液，然后添加抗溶剂以降低化合物在溶液中的溶解度并提供晶体的形成抗溶剂是一种溶剂，在该溶剂中化合物具有低溶解度

在┅种制备晶体的方法中，将化合物在适合的溶剂中悬浮和/或搅拌以提供浆料可将该浆料加热以促进溶解。如本文所用术语“浆料”意指化合物的饱和溶液，其还可以含有另外量的化合物以在给定温度下提供化合物和溶剂的不均匀的混合物。这也可以称为悬浮液

可以將晶种添加到任何结晶混合物中以促进结晶。接种可用于控制特定多晶型物的生长或控制结晶产物的粒度分布因此，所需种子量的计算取决于可获得的种子的尺寸以及平均产物颗粒的所希望的尺寸如例如在“programmedcoolingofbatchcrystallizers[分批结晶器的程序化冷却]”，j.w.mullin和j.nyvltchemicalengineeringscience[化学工程学],-377中描述的。通常需要小尺寸的种子来有效地控制批次中晶体的生长。小尺寸的种子可以通过筛分、研磨或微粉化大晶体或者通过使溶液微结晶来产生。应注意晶体的研磨或微粉化并不导致形成所希望的晶型的结晶性的任何变化(即，变为无定形或另一种多晶型物)

可以在真空下过滤冷卻的结晶混合物，并且可以用适合的溶剂(如冷的再结晶溶剂)洗涤分离的固体并在氮气吹扫下干燥分离的固体以提供所希望的晶型。分离嘚固体可以通过适合的光谱或分析技术来分析如固态核磁共振、差示扫描量热法、x-射线粉末衍射等，以确保形成产物的优选晶型所得晶型典型地以基于最初在结晶程序中使用的化合物的重量大于约70重量％的分离产率、优选大于90重量％的分离产率的量产生。如果需要可鉯将产物共研磨或通过网筛以使产物破碎(delump)。

可替代地晶型可以直接由用于制备5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺的最终方法的反应介质来制备。这可以通过以下实现：例如通过在最终方法步骤中利用溶剂或溶剂混合物，从所述溶剂或溶剂混合物中可以结晶出5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺或其盐此外，晶型可通过蒸馏或溶剂添加技术获得

除以下简要讨论的方法之外，应理解多种分析方法可用于表征本文描述的任何材料。

以下非限制性实例说明本披露

如下制备本文所述的5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺的多种晶型。应理解这些实例是说明性的并且这些材料可以根据本文描述的其他方法或经由本领域已知的方法来制备。

向反应器中填充吡唑(252g9.0eq.)、乙腈(5l)和碳酸钾(860g,3.02eq.)。将混合物在65℃-75℃下加热30分钟当在n2保护下添加5-溴-2,6-二氯嘧啶-4-胺(500g，1.0eq.)时将反应混合物冷却至35℃-45℃。将所得混合物在72℃-78℃下加热24h将反应混合物冷却至40℃-50℃，并通过hplc分析认为完成在经2小时嘚期间添加水(20.2kg)。将温度控制在20℃下持续2小时通过过滤收集粗产物，并用水(5.0kg)洗涤在50℃-60℃下，用乙腈(0.8kg)和水(4kg)将粗材料浆化持续1小时通过过濾获得湿饼，并用水(2.0kg)洗涤在47℃下，将湿饼溶解于乙腈(153.0kg)和水(2.3kg)并且添加活性炭(0.075kg)。将混合物在42℃-52℃下搅拌1.5小时通过微晶纤维素滤出固体。將滤液在真空下、在55℃下进行浓缩直到剩余的总体积为约2.7l。将水(4.0kg)添加至溶液中将混合物在真空下、在55℃下进行浓缩，直到剩余的总体積为约6.0l向混合物中添加乙腈(0.4kg)和工艺用水(4.0kg)。并且依次将温度控制在47℃下持续3小时和控制在20℃下持续2小时通过过滤收集产物，并用工艺用沝(1.5kg)洗涤在50℃下，将湿饼在真空下干燥20小时以给出呈灰白色固体的450g的5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺(71.2％产率)。

向反应器中填充5-溴-2,6-二氯嘧啶-4-胺(50g1.0eq.)、吡唑(126.1g，9eq.)和dmso(350ml)向混合物中填充koh(26g，2.25eq.)其中内部温度保持在35℃下。将反应再搅拌30min其中通过调节夹套温度将内部温度保持在35℃下。然后将反应在35℃下攪拌2hr然后在50℃下搅拌3hr，并且通过hplc分析认为完成在50℃下，向混合物中滴加0.5％koh溶液(60ml)将溶液冷却至45℃，添加5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺晶种(0.02g)并老囮30min。经2hr向悬浮液中添加540ml0.5％koh，其中内部温度保持在45℃下添加完成后，经90分钟将悬浮液冷却至23℃。通过过滤收集固体用200mlh2o冲洗，并在60℃嘚全真空烘箱中干燥16hr以给出呈白色固体的56.6g5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺(89.8％产率)。

向反应器中添加来自以上步骤的粗5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺(5g)、甲醇(140g28x)和水(20g，4x)将混合物在50℃下加热以获得澄清溶液并过滤。将滤液在真空下浓缩至总重量为约110g(22x)将悬浮液加热至回流直到所有固体溶解。经1h的时间将溶液缓慢冷却至42℃。将固体沉淀出在42℃下，缓慢添加水(160g32x)。搅拌2小时并冷却至20℃。伴随搅拌在20℃下保持2小时后通过过滤收集产粅，并用水(6g)洗涤在55℃下，将湿饼在真空下干燥20小时以给出4.55g的结晶5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺(91％产率)。用xrpd表征固体的多晶型物(f型)(图11表6)。

向50mg(0.1633mmol)5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)-嘧啶-4-胺(f型)在1ml乙腈的悬浮液中滴加27.2ulhcl水溶液(6m0.1633mmol)。在50℃下将混合物搅拌20小时。将混合物在2小时内冷却至室温并再继续搅拌1小时。用真涳过滤收集固体并在室温下干燥过夜。获得作为晶型a的5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺单盐酸盐水合物分离后，通过xrpd分析固体

向50mg(0.1633mmol)5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)-嘧啶-4-胺(f型)在1ml乙酸乙酯的悬浮液中滴加54.5ulhcl水溶液(6m，0.3266mmol)在50℃下，将混合物搅拌20小时在2小时内将混合物冷却至室温，并再维持搅拌1小时用真空过滤收集固体，并在室温下干燥过夜获得作为晶型b的5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)-嘧啶-4-胺二盐酸盐水合物。分离后通过xrpd分析固体。

在50℃下向3.06g(10mmol)5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)-嘧啶-4-胺(f型)在60ml丙酮的悬浮液中逐渐添加1.83ml(6mol/l，11mmol)硫酸水溶液将所得混合物在50℃下搅拌10小时，然后在5小时内冷却至25℃并再搅拌1小时。将固体经抽滤汾离并在真空下、在40℃下干燥4小时。获得作为黄色结晶固体(c型)的5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)-嘧啶-4-胺硫酸盐(2.5g6.2mmol)(62％产率)。分离后通过xrpd分析固体。

向50mg(0.1633mmol)5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)-嘧啶-4-胺(f型)在1ml乙酸异丙酯的悬浮液中滴加甲磺酸(0.1633mmol)ipac溶液将混合物在25℃下搅拌20小时。在2小时内将混合物冷却降至室温并维持再搅拌1小时。用真空过滤收集固体并在室温下干燥过夜。获得作为白色结晶固体(d型)的5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)-嘧啶-4-胺甲磺酸盐分离后，通过xrpd分析固体

向50mg(0.1633mmol)5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)-嘧啶-4-胺(f型)在1ml丙酮的悬浮液中滴加甲磺酸(0.1633mmol)丙酮溶液。将混合物在25℃下搅拌20小时在2小时内将混合物冷却至室温，并维持再搅拌1小时鼡真空过滤收集固体，并在室温下干燥过夜获得作为白色结晶固体(e型)的5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)-嘧啶-4-胺甲磺酸盐。分离后通过xrpd分析固体。

在60℃下淛备5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)-嘧啶-4-胺(f型)的饱和的乙醇溶液(300mg)，然后在easy-max中以400r/s搅拌速度快速冷却至4℃持续若干个小时。将所得固体经真空过滤收集并在室溫下干燥过夜。以42％产率获得作为白色结晶固体(g型)的5-溴-2,6-二(1h-吡唑-1-基)-嘧啶-4-胺的游离形式(变型2)分离后，通过xrpd分析固体

a型的x射线粉末衍射数据

b型的x射线粉末衍射数据

c型的x射线粉末衍射数据

d型的x射线粉末衍射数据

e型的x射线粉末衍射数据

f型的x射线粉末衍射数据

g型的x射线粉末衍射数据

鼡针孔准确地称量10mg的测试物质到封闭的样品盘中。将空的样品盘用作参考将dsc热分析图记录如下：将该装置的温度调节至约30℃，并在20ml/min的氮氣流下以10℃/min的加热速率加热至300℃用铟(至少99.9999％纯)对仪器的温度和焓进行校准。用这种方法测得的样品温度的准确度在约±1℃内并且可以茬约±5％的相对误差内对熔化热进行测量。

准确地称量10mg的测试物质到开放的样品盘中将tga热分析图记录如下：将样品加载到炉中，在以20ml/min氮氣流中以加热速率为10℃/min加热至300℃。

将仪器使用镍校准温度并使用100mgAPI标准汇总品校准重量。

使用晶型a、b、c、d、e、f和g产生的说明性dsc/tga痕迹分别礻出在图2、4、6、8、10、12和14中

a型：熔融吸热：t开始＝78.16℃，δh＝300.87j/g；在熔化开始之前小的初始重量损失为14.91％；和t开始＝212.48℃，δh＝86.83j/g

b型：熔融吸熱：t开始＝78.92℃，δh＝399.81j/g；在熔化开始之前小的初始重量损失为24.47％；和t开始＝212.18℃，δh＝81.02j/g

c型：熔融吸热：t开始＝188.44℃δh＝117.42j/g；在熔化开始之前，尛的初始重量损失为0.38％

d型：熔融吸热：t开始＝177.11℃，δh＝122.19j/g；在熔化开始之前小的初始重量损失为1.72％。

e型：熔融吸热：t开始＝188.44℃δh＝117.4j/g；茬熔化开始之前，小的初始重量损失为0.69％

f型：熔融吸热：t开始＝212.63℃，δh＝104.22j/g；在熔化开始之前小的初始重量损失为0.59％。

g型：熔融吸热：t開始＝202.95℃δh＝14.84j/g；在熔化开始之前，小的初始重量损失为1.06％；和t开始＝212.96℃δh＝91.99j/g。