新派宠物Repitzoo爬虫加热垫 蜘蛛角蛙仓鼠刺猬陆龟蛇恒温控防水
东西挺好的，就是尺寸没选好?好评好评好评好评好评好评好评好评好评好评好评好评好评好评好评好评好评好评好评好评好评
颜色分类:7瓦 28x15cm
发的第一个、裂了、卖家服务没得说、立马发回一个新的给我、良好的购物体验.
颜色分类:7瓦 28x15cm
还没用不过感觉质量不错
颜色分类:5瓦 14x15cm
放在底部的，暂时没有什么感觉
颜色分类:5瓦 14x15cm
不错，包装很认真的。东西质量一看就是好东西。绝对真真的没问题！下次继续再来。
颜色分类:7瓦 28x15cm
颜色分类:7瓦 28x15cm
很好的卖家，一直相信新派！
颜色分类:7瓦 28x15cm
还没开始用，等冬天再试试
颜色分类:5瓦 14x15cm
买了最小瓦，温度最高能到35以上，对蛇苗来说太高了，分别在加热垫上，箱子里垫了三本书，温度才控制到30度，还是用调温的更方便。
颜色分类:5瓦 14x15cm
颜色分类:5瓦 14x15cmrepit&卷发怎么样,好不好
repit 卷发怎么样,好不好
<img src="http://simg.sinajs.cn/blog7style/images/common/sg_trans.gif" real_src ="http://img4.tbcdn.cn/tfscom/i1//TB2RYZDlVXXXXbVXpXXXXXXXXXX_!!.jpg" WIDTH="380" HEIGHT="380" BORDER="0" ALT=""
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以下是网友对该产品的真实评价
不知道是不是正品，不过说明书跟我买的型号是对不上的，用的话还是可以的，还在研究当中
好用！比以前买的卷发棒好用多了。
很好用，插上电内扣分分钟就搞定，已经推荐给朋友了！
第一次用比较好上手，温度也适中，电源线也够长，方便使用，就是刚收到货就降价啦，不开心！
对于新手来说实在太方便了，完全不担心烫手，升温和成型都好快，再也不担心出门造型了，相当满意！
新手第一次买卷发棒，不知真假。 不会烫到自己，这是新手觉得这个卷发棒最大的优点。
但定型效果一般，而且觉得挺伤头发的。
很好用呀，关键是不会烫手，这点很重要！第一次卷还不是很顺手，希望以后能卷出更好的发型，亲们不要犹豫啦
我买的是32M，所以弯度很自然，拿在手里很有质感。刚开始还不太会用，客服态度很好，谢谢讲解！
其他的还不知道 不容易被烫伤才是真的
卖家服务态度很好，卷发棒用了很不错。
这个我之前用过，但是网上的便宜。收到的宝贝和我之前用的一样。我那个就是老师从韩国带回来的。不过我买大了一码，不过也不错。好评！
好用！包装也很漂亮！拆了快递拿到手以后小试了一下，完全不会烫手，而且感觉也很有质量，好评！
还不太会用，不过不烫手是真的
很好用，而且我是手残党，第一次就可以卷成想要的感觉，而且手只要不碰到最里面都不会伤到，总之就是蛮好用的，选一个好点的还可以不伤头发
第一次用就达到了期望的效果，简单好用，非常适合到肩长度的发型。开始还以为温度调节有问题，其实需要按住开机键的同时调节温度哦，客服很耐心。
还不错，防烫伤。做内扣挺好的，刘海还不会倒腾。。
己经用过了还不熟练,但是挺方便的
还没完全掌握用法，得多试试，感觉一定得卷之前涂点东西。否则卷完好干的感觉，还是会伤头发的吧。东西还不错啦，手残星人还觉得挺方便的。
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资料评价：不同温度对无水保活条件下的中华鳖肌肉营养成分及血液生化指标影响
中华鳖(P e l o d i s c u s s i n e n s i s)属于爬行纲(Repitlia)、龟鳖目(Testudinata)、鳖科(Tironychidae),俗称甲鱼、团鱼、王八等,我国现已成为世界鳖养殖第一大国。我国95%以上的水产品以鲜活形式上市销售,保活运输是水产品由养殖基地到销售市场的关键环节。目前,水产品保活技术主要有充氧保活、麻醉保活、有水保活、无水保活等[1]。中华鳖抗逆性较强,对氧气和水分的要求量不高,易于保活,因此国内外对中华鳖无水保活的研究尚未见报道。然而随着物流小包装水产品礼盒的兴起,礼盒装的中华鳖夏季低温保活的需求也被提了出来。中华鳖具有冬眠特点,属于变温动物,对温度变化较敏感,曾有研究表明温度是影响水产品正常生理功能的重要因素之一,它不但影响其标准代谢及内源氮的代谢,而且还影响机体免疫功能及健康等[2]。温度可能是影响中华鳖夏季无水保活运输的关键因素,鉴于此,本实验主要研究不同温度...&
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鲍鱼是中国传统名贵食材之一,自古以来就被推崇为“四大海味”之首。在生物学分类中属软体动物门(Mollus-ca)腹足纲(Gastrooda)鲍科(Haliotidae)鲍属(Haliotis)的单壳海生贝类[1]。至今全世界范围内已发现有记载的鲍鱼种类约216种,其中常见种类约有40种,有渔业经济价值的约20种,分布在中国沿海的主要有7种[2]。中国目前已开展人工增殖养殖的品种包括皱纹盘鲍(Haliotis discus han-nai Ino)、杂色鲍(Haliotis diversicolor diversicolor)以及九孔鲍(H.diversicolor aquatilis Reeve)[3]。截止2012年,中国各海区鲍鱼养殖面积已达1.27×104 hm2,鲍鱼养殖总产量为9.07×104 t,苗种产量达74.64亿粒[4]。在销售方面,仅大连獐子岛集团一家在2011年的鲍鱼销售金额就逾3.10亿人民币[5]。因此...&
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鲟鱼(Sturgeon)隶属于硬骨鱼纲、辐鳍亚纲、硬鳞总目、鲟形目[1],是一种食用价值极高的大型经济鱼类,肉味鲜美、健脑益身,营养价值极高[2],具有重要的学术研究和经济价值。近年来,水产品销售市场上鲜活鲟鱼备受消费者青睐,消费量也急剧增加。但是,在运输过程中经常出现损伤、死亡、药物残留等现象而影响品质。随着人们对鲜活水产品品质要求的不断提高,安全、高效、绿色的运输将成为保证品质的重要环节之一[3]。在鲜活水产品流通市场上,目前最主要的运输模式是有水运输,但该方法存在运输时间短、距离短、存活率低、安全性低、成本高等诸多劣势[4]。为克服有水运输存在的各种不足,刘伟东等[5]就低温下大菱鲆有水和无水保活过程中生理生化变化做了研究。结果表明:有水保活的大菱鲆血液中BUN、CR、UA和GLU显著低于无水保活,对有水和无水保活的效果进行对比,从而说明有水保活的不足之处和无水保活的优势。纪利芹等[6]探寻了连续降温对大菱鲆成鱼代谢机能的...&
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半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)是我国特有的名贵海水鲆鲽鱼类之一,属于近海温水性底层鱼类,主要分布于北方沿海地区。半滑舌鳎味道鲜美、肉质细嫩、营养丰富,深受广大消费者欢迎,其市场价值极高,养殖前景非常广阔,已成为我国海水增养殖鱼类优良品种[1]。随着人们生活水平的不断提高,以及电子商务技术的不断发展,中西部地区对海水鱼类的消费急剧增加,因此,新型电商模式下,如何实现海水鱼类向内陆地区低成本、高成活率的运输流通是亟待解决的问题。低温保活运输是一种低成本、高存活率、长时间、高品质,且优于其它相关技术的绿色保活方法[2]。该技术在水产品中的研究历史虽然较长[3-4],但是研究比较分散,不成体系,缺乏应用。我国对水产品无水保活运输技术研究的学者较多,主要对大菱鲆[5]、泥鳅[6]、中华鳖[7]、罗非鱼[8]进行了研究,结果均表明能够有效地延长保活时间、提高成活率、降低成本。随着该技术研究的不断深入系统,学者们发现...&
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近年来,我国渔业发展迅猛,其产量逐年增加,国内活鱼运输市场庞大,南鱼北调、北鱼南运均很常见,但由于时空差异、保活技术工艺、运输装备欠缺、智能信息化落后、供应链管理不协调等原因,活海鱼运输难等问题随之产生,从而大大限制了渔业活体销售市场的发展。目前,活鱼运输的主要方式仍然为有水运输,主要通过增加水中溶氧量、适当降低水温、改变盐度和辅助麻醉等方式提高运输量和存活率[1-4],但由于运输过程中携载大量水,从而大大增加了成本,同时,成活率不高[5]。随着新型电商模式的不断发展并渗透至生鲜领域,消费者对鲜活水产品的需求量也逐年递增[6]。因此,如何有效地将鲜活水产品运输至终端消费者是亟待解决的问题。水产品无水保活运输是一种新型的流通技术,主要原理是将不同水产品诱导进入休眠状态,然后再进行无水保活并运输[7-8]。早在20世纪60年代,日本山根昭美博士就开始对该项技术展开研究,但并未继续深入探索下去[9]。近年来,我国对无水活运流通技术的研...&
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海湾扇贝Argopecten irradians又称大西洋内湾扇贝,是中国主要的海产经济贝类之一,其适应性强、生长快、养殖周期短、产量高,是沿海地区养殖业中的支柱产业,也是中国出口创汇的重要品种之一。海湾扇贝具有高蛋白质、低脂肪,以及含有较多牛磺酸、DHA、EPA、糖原等生理活性物质的特点,其肉味鲜美、营养价值高,深受大众喜爱。但其长途运输过程中海湾扇贝的保活率已成为制约海湾扇贝产业发展的主要问题之一,而衡量保活效果的主要指标是保活过程中其营养成分和生化特性是否能够很好地保持。目前,无水保活技术由于存活率高、成本低、运载量大、无污染,受到国内外研究学者的高度重视,不仅对低温、冰温无水保活技术应用于贝类运输保活进行了研究,同时对保活效果也进行了研究,并取得了重要的成果。现有的研究主要集中在对无水保活过程中贝类的主要化学成分变化[1-2]、营养成分变化[3-5]、生化与呈味物质变化[6-11]、营养与氨基酸变化[12-14]和腺苷三...&
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中华鳖裙边胶原蛋白的提取及其特征
第 34 卷第 6 期 2010 年 6 月水产学报JOURNAL OF FISHERIES OF CHINAVol. 34 ，No. 6 June， 2010文章编号： 1000 － 0615 （ 2010 ） 06 － 0981 － 08DOI： 10. 3724 / SP. J. . 06800中华鳖裙边胶原蛋白的提取及其特征1* 2 1 1 1 1 1 陆剑锋 ， 万 全 ， 殷章敏 ， 林 琳 ， 翁世兵 ， 叶应旺 ， 姜绍通（ 1. 合肥工业大学生物与食品工程学院， 安徽 合肥 230009 ； 2. 安徽农业大学动物科技学院， 安徽 合肥 230036 ）摘要： 胶原蛋白是生物体内一种重要的蛋白质， 也是结缔组织的主要蛋白成分。 与陆生动物 （ 如猪、 ） ， 牛等 比较 水生动物胶原蛋白具有优良的理化性质和生理活性功能 ， 已引起人们的广 泛关注。中华鳖是我国传统的名贵水产品 ， 其裙边胶原蛋白含量丰富， 具有极高的药用价值和 营养价值。采用胃蛋白酶酶解法在酸性条件下提取中华鳖裙边胶原蛋白 ， 研究酶添加量、 底物 提 取 时 间 对 提 取 效 果 的 影 响， 确 定 了 制 备 裙 边 胶 原 蛋 白 的 最 适 条 件 为： 酶 添 加 量 浓度、 4 mg / mL， 底物浓度 4% ， 提取时间 14 h。粗提胶原蛋白通过盐析、 透析等纯化步骤， 再经 SDSPAGE 电泳、 热变性温度测定、 紫外及傅立叶变换红外扫描等技术方法分析了胶原蛋白的生化 结果显示提取到的裙边胶原蛋白具有较高的纯度 ， 含有两条 α 链和 1 条 β 链， 属于典型 特征， 的 I 型胶原蛋白。研究表明： 中华鳖裙边胶原蛋白可以作为猪皮、 牛皮胶原蛋白的有效替代 品， 这为今后进一步综合开发利用鳖类裙边胶原多肽提供了科学的理论依据 。 关键词： 中华鳖； 裙边； 胶原蛋白； 提取； 纯化 中图分类号： TS 254. 4 文献标识码： A 因此寻找新的胶原蛋 源于牲畜的胶原蛋白制品， ［ 5 － 6］ 。而以水产动物为原 白来源显得愈来愈迫切 料制备的胶原产品是近年来被世界公认的一种安 全性较高的胶原蛋白来源， 备受国内外消费市场 的青睐。 中华鳖 （ Pelodiscus sinensis Wiegmann ） 是我国 俗称甲鱼、 团鱼、 水鱼、 王八、 神 传统的名贵水产品， 守等， 隶属爬行纲（ Repitlia） 、 鱼鳖目（ Testudinata） 、 ［ 7］ 鳖科（ Tironychidae ） 、 鳖属 （ Pelodiscus ） 。 鳖类的 生理活性物质及其抗癌药品、 保健食品的开发是研 滋补强身 究的热点。中医药认为鳖类有活血消淤， 可作为重病或手术后身体虚弱者的保健食 的功效， ［ 8］ 品 。鳖甲 周 围 的 结 缔 软 组 织 通 常 被 称 为“裙 ， 边” 裙边胶原蛋白含量丰富， 是最具滋补的部分， ［ 7 － 8］ 。目前对鱼 具有极高的药用价值和营养价值 类等水产动物胶原蛋白（ 如鱼皮、 鱼骨、 鱼鳞、 鱼鳍 ［ 9 － 10］ ） 的研究有很多， 或鱼翅 但有关鳖类裙边胶原 蛋白方面的报道较少。对裙边胶原蛋白采用水解胶原（ collagen ） 是细胞外基质的一种结构蛋 白质， 它含有一个或几个由 α － 链组成的三螺旋 ［ 1］ 结构的区域， 即胶原域 。 胶原具有保护机体和 支撑器官的作用， 主要存在于动物肌腱、 韧带、 软 血管壁、 皮肤及结缔组织中， 占哺乳动物体内 骨、 ［ 2］ 蛋白质总量的 25% ～ 30% 。 胶原蛋白及其水 解得到的多肽产物不仅具有良好的消化吸收特 ［ 3 － 4］ ， 而且还具有许多重要的生理活性功能 在 性， 生物制药 （ 或医学 ） 、 医疗保健、 食品工业、 皮革产 业、 感光材料、 美容化妆品行业等方面都已得到广 泛应用。 长期以来， 工业胶原蛋白的来源仅限于猪、 牛 等陆 生 动 物， 但 随 着 疯 牛 病 （ bovine spongiform andmouth encephalopathy，BSE ） 、口 蹄 疫 （ footdisease， FMD ） 、 AI ） 及 其 禽流感 （ avian Influenza， （ zoonosis ） 的爆发和盛行， 人们 它一些人畜共患病 逐渐对牲畜等胶原制品的安全性产生了质疑 。 此 习惯等原因， 有些地区也不能使用来 外由于宗教、收稿日期：
修回日期： 060110 ） 资助项目： 安徽省重大科技攻关项目（
） ； 合肥工业大学学生创新基金资助项目（ 113Email： lujf@ sibs. ac. cn 通讯作者： 陆剑锋，982水产学报34 卷技术等加工处理， 将有助于找到一些具有独特生理 。 功能的活性肽 本实验通过生物酶法研究中华鳖 纯化条件， 并分析了裙边胶 裙边胶原蛋白的提取、 原蛋白的基本特征， 旨在为今后进一步综合开发利 用有关鳖类的裙边胶原多肽提供科学的理论依据。馏水反复洗涤， 充分沥干后备用。 1. 6 裙边胶原蛋白的提取 胃蛋白酶只对胶原蛋白的非螺旋区域起作 用， 对螺旋区不进行水解， 采用胃蛋白酶制备胶原 蛋白是目前应用效果比较好的一种方法［ 11 ］。由11. 1材料与方法实验材料 中华鳖购于合肥马鞍山路周谷堆农贸批发市需在酸性环境下 于胃蛋白酶的最适 pH 为 2 ～ 3 ， ， 1% 柠檬酸作为酶解 才能提取 因此本实验采用 它除了有助于提取酸溶性胶原外 ， 还可 提取介质， 使裙边变得更加溶胀 （ 或使其结构更加蓬松 ） ， 更 有利于蛋白酶的水解提取。本实验考察了酶添加 底物浓度、 酶解时间对胶原蛋白提取的影响 量、 （ 测定水解液中羟脯氨酸含量， 以羟脯氨酸含量 较高为好 ） ， 并在单因素的基础进行正交优化实 进一步确定了裙边胶原蛋白最佳提取工艺 。 验， 1. 7 提取液中裙边胶原蛋白含量的测定 羟脯胺酸是胶原蛋白中一种特征氨基酸， 在 它是由相应的脯氨酸残 其它蛋白质中含量较少， 基经羟基化反应生成的， 因此通过羟脯氨酸的测 定可确定胶原蛋白的含量［ 12 ］选用 2 ～ 3 年 生 长 期 的 中 华 鳖， 体重范围为 场， 550 ～ 600 g。先将中华鳖去头 （ 放血 ） 后致死， 然 裙边等分割后装入密封保鲜袋中 ， 于 后将其肌肉、 － 20 ℃ 下冷藏备用。所用试剂均为分析纯， 胃蛋 白酶活力为 1 200 IU / g。 1. 2 中华鳖裙边基本营养成分测定 水分的测定采用直接干燥法 （ GB / T 5009. 3 － 2003 ） ； 粗 蛋 白 含 量 的 测 定 采 用 凯 氏 定 氮 法 （ GB / T 5009. 5 － 2003 ） ； 粗脂肪含量的测定采用 索氏抽提法 （ GB / T 5009. 6 － 2003 ） ； 灰分的测定 采用干法灰化法（ GB / T 5009. 4 － 2003 ） 。 1. 3 中华鳖裙边胶原蛋白的提取工艺 中华鳖裙边原料预处理?→去除非胶原蛋白 ?→去除脂肪 ?→ 胃蛋白酶提取 ?→ 盐析、 透析 纯化?→低温冷冻干燥?→胶原蛋白。 1. 4 L － 羟脯氨酸标准曲线的绘制 称取 50. 0 mg L － 羟脯氨酸用少量水溶解， 加 一滴 6 mol / L 盐酸， 定容至 100 mL 容量瓶中， 吸 取该溶液 1. 00 mL 于 100 mL 容量瓶中定容， 获得 浓度为 5 μg / mL 羟脯氨酸标准工作液。 分别吸 5、 10 、 15 、 20 、 25 mL， 定容至 取上述标准工作液 0 、 50 mL 容量瓶中， 0. 5 、 1. 0 、 1. 5 、 2. 0 、 2. 5 获得 0 、 μg / mL 的羟脯氨酸标准溶液。6 种不同浓度的羟 脯氨酸标准溶液经过氯胺 T 氧化， 生成含有吡咯 以对二甲基氨基苯甲醛进行显色 ， 在 环的氧化物， 558 nm 处比色测定吸光度， 并绘制相应的标准曲 线（ GB 9695 23 － 1990 ） 。 1. 5 裙边非胶原蛋白成分的去除 取出中华鳖裙边解冻， 称取 10 g 后， 用 2. 5% 的 NaCl 溶液（ 1∶ 30 W / V， 下同） 于 20 ℃ 下连续磁 力搅拌 24 h， 以去除水溶性和盐溶性杂蛋白 （ 非 胶原蛋白成分） ， 然后用蒸馏水反复洗涤， 充分沥 干后备用。再加入与 NaCl 溶液同量的 10% 异丙 醇溶液于 20 ℃ 浸泡 24 h， 以去除脂肪， 然后用蒸。 吸取 0. 5 mL 裙边加入 1 mL 6 mol / 胶原蛋白粗提液放入安瓿瓶中， L 的 HCl， 在酒精喷灯上迅速封管， 置于 130 ℃ 的 水 解 后 的 液 体 经 稀 释 后， 移入 烘箱中水 解 3 h， 100 mL 容量瓶中定容。 取 4 mL 滤液， 按羟脯氨 酸标准曲线法（ GB 9695 23 － 1990 ） 测定水解液中 的羟脯氨酸含量。 1. 8 裙边胶原蛋白的纯化 用最优方案提取胶原蛋白， 溶出物经过滤后 4 ℃ 冷冻离心 20 min， 倾出上清 以 6 000 r / min、 4 ℃ 盐析 液， 加 NaCl 至其最终浓度为 0. 9 mol / L， 4 ℃ 冷冻离心 20 过夜； 盐析后再以 6 000 r / min、 min， 沉淀用 0. 5 mol / L 乙酸溶解， 重复盐析和溶 解操作 1 次， 将得到的蛋白液移入透析袋， 用蒸馏 水透析 3 d， 每天更换透析水 2 ～ 3 次， 透析后进行 1 型真空冷冻干燥机， 北京博 真空冷冻干燥 （ FD医康实验仪器有限公司） 。 1. 9 胶原蛋白的紫外扫描 纯化的胶原蛋白样品溶液采用紫外分光光度 1600 全波段紫外扫描分光光度计， 计（ UV北京瑞 利分析仪器有限公司 ） 进行扫描， 波长间隔1 nm， 波长范围为 190 ～ 400 nm。 1. 10 胶原蛋白的 SDS － 聚丙烯酰氨凝胶电泳 （ SDSPAGE） 参照 Laemmi［ 13 ］电泳系统对纯化的胶原蛋白6期陆剑锋， 等： 中华鳖裙边胶原蛋白的提取及其特征983PAGE 垂直电泳（ DYY11 型电 样品溶液进行 SDS北京市六一仪器厂 ） 。分离胶浓度为 10% ， 泳仪， 200 V 电泳 30 min， 浓缩胶浓度为4% ， 用考马司 250 染色液 （ 考马斯亮蓝 R250 0. 5 g， 甲 亮蓝 R醇 225 mL， 蒸馏水 225 mL， 冰醋酸 50 mL） 染色 15 min， 脱色液（ 甲醇 100 mL， 冰醋酸 100 mL， 蒸馏水 800 mL） 脱色并拍照。 1. 11 裙边胶原蛋白的氨基酸（ AA） 测定 称取冷冻干燥后的纯化样品 1 mg 放入安瓿 瓶中， 加 2 mL 6 mol / L HCl（ 色氨酸测定采用 KOH 水解） ， 并充入少量氮气， 在酒精喷灯下迅速封管 后置于 110 ℃ 烘箱中水解 24 h。水解结束冷却后 移至坩埚， 在 70 ℃ 水浴锅中挥发剩余盐酸， 再加 入少量双蒸水蒸干， 重复 3 次， 用适量 pH 2. 20 的 缓冲液溶解后定容， 最后用 0. 22 μm 微孔滤膜抽 滤， 滤 液 采 用 氨 基 酸 全 自 动 分 析 仪 （ HITACH L8800 ， 日本 HITACH 公司） 进行测定。 1. 12 胶原蛋白的热变性温度测定［ 14 ］ 样品制备参照 Kittiphattanabawon 等 的 方 法。将冷冻干燥后的纯化样品用 50 mmol / L 的乙表 1 中华鳖的基本营养成分（ 以湿基计） Tab. 1 Content of basic nutrition in Pelodiscus
sinensis（ on wet basis） X ± SD基本营养含量（ % ） basic nutrition content 粗蛋白 crude protein 粗脂肪 crude fat 水分 moisture 灰分 ash 裙边 calipash 26. 60 ± 3. 04 0. 11 ± 0. 01 71. 60 ± 4. 23 0. 71 ± 0. 06 肌肉 muscle 16. 76 ± 1. 25 0. 21 ± 0. 04 81. 05 ± 0. 86 1. 06 ± 0. 042. 2羟脯氨酸标准曲线及胶原蛋白的测定 L － 羟脯氨酸质量浓度 以吸光度值为纵坐标，为横坐标绘制标准曲线 （ 图 1 ） ， 计算其回归方程 2 为： y = 0. 220 5x － 0. 000 5， 变异系数R = 0. 999 8。样品和溶剂的比率为 1 ∶ 40 酸溶解进行复水化， （ W / V） 。采用差示扫描量热仪（ DSC 821 e ， 梅特勒 － 托利多仪器有限公司 ） 测定热变性温度， 使用 铟和锡作为标准物对仪器进行温度和焓值的校 准。测定时精确称量 5 ～ 10 mg 样品溶液放入铝 坩埚后密封， 扫描温度范围为 20 ～ 50 ℃ ， 升温速 并用空气压缩机进行冷却， 以一个 率为 1 ℃ / min， 空的铝坩埚作为空白对照。 1. 13 胶原蛋白的傅立叶变换红外扫描 （ FTIR） 称取冷冻干燥后的纯化样品约 1 ～ 2 mg， 与 一定量干燥好的 KBr 混合置于玛瑙研钵中， 研磨 均匀（ 尽量成细微粉末状 ） 后装样， 手动压片， 采 用傅 立 叶 变 换 红 外 扫 描 仪 （ Nicolet 5700 ， 美国 Thermo 公司） 在 400 ～ 4 000 cm － 1 区间内进行吸 收波谱扫描。图1 Fig. 1L － 羟脯氨酸标准曲线Standard curve of Lhydroxyproline由标准曲线或回归方程可得出相应吸光度的 羟脯胺酸含量， 胶原蛋白含量 = 羟脯胺酸含量 × ［ 12 ］ 换算系数 11. 1 。经实验测定， 中华鳖的裙边胶 原蛋白含量达到 60. 87% （ 干基） 。 2. 3 胶原蛋白提取中酶添加量的确定 3 底物浓度为 2% ， 添加不同酶量 （ 1 mg / mL，mg / mL， 5 mg / mL， 7 mg / mL， 9 mg / mL ） ， 反应 3 h， 取 0. 5 mL 样品置于安瓿瓶中， 加 1 mL 6 mol / L HCl， 在 130 ℃ 下水解 3 h， 水解液稀释 100 倍后测 定 Hyp 吸光度值（ 图 2 ） 。结果显示随着酶添加量 的不断上升， 溶出的 L － 羟脯氨酸含量也越来越 L － 羟脯氨酸含量增加 但达到 5 mg / mL 以后， 高， 变缓， 同时也增加了蛋白酶的消耗量， 综合考虑成 本问题， 酶添加量不宜超过 5 mg / mL。 2. 4 胶原蛋白提取中底物浓度的确定 酶添加量为 5 mg / mL， 底物浓度分别为 1% 、22. 1结果与分析中华鳖的裙边基本营养成分 由表 1 可知， 中华鳖裙边粗蛋白含量明显高于肌肉粗蛋白含量， 干物质占 28% 左右， 粗蛋白 达到干物质总量的 88. 71% ， 可见中华鳖裙边是 良好的蛋白质来源。此外， 裙边脂肪、 灰分含量均 较低， 有利于胶原蛋白的提取和纯化。2% 、 4% 、 6% 、 8% ， 20 ℃ 反应 3 h， 取 0. 5 mL 加 1 mL 6 mol / L HCl 在 130 ℃ 下水解 3 h， 水解液稀 释 100 倍后测定 Hyp 吸光度值 （ 图 3 ） 。 结果显 示： 溶出的 L － 羟脯氨酸含量与底物浓度呈现出 正相关， 当底物浓度高于 4% 时， 胶原蛋白提取率984水产学报34 卷虽仍有一定上升趋势， 但影响程度明显减弱， 故选 择 4% 左右的底物浓度较为合适。2. 6酶水解条件的优化依据单 因 素 试 验 初 步 确 定 的 酶 解 条 件 （ 表 2） ， 选择酶解时间 （ A ） 、 加酶量 （ B ） 与底物浓度 （ C ） 作为试验因子， 以溶出 L － 羟脯氨酸含量为 4 指标， 采用 L9 （ 3 ） 正交试验设计， 对裙边的酶解 条件进行优化。不同因素水平组合的正交试验设 计方案与试验结果见表 3 。Tab. 2水平 level 1 2 3表 2 正交试验设计表 Orthogonal design of experimentB 底物浓度（ % ） substrate concentration 5 4 6 C 酶解时间（ h） hydrolysis duration 12 14 10图2 ig. 2酶添加量对吸光度的影响A 酶添加量 （ mg / mL） enzyme amount 6 4 5Relation between enzyme amount and absorbance由极差分析结果可知 ， 影响裙边胶原蛋白提 取率的主次因素为 C & B & A ； 最 佳 因 素 水 平 组 合为 C 2 B 2 A 2 ， 即酶添加量为 4 mg / mL， 底物浓度 4% ， 酶 解 时 间 为 14 h 。 经 重 复 验 证 ， 该方案图3 Fig. 3 底物浓度对吸光度的影响 and absorbance Relation between the substrate concentration可行 。 2. 7 紫外扫描图谱 裙边胶 原 蛋 白 样 品 溶 液 经 紫 外 波 谱 扫 描 （ 图 5） ， 在 200 ～ 230 nm 之 间 有 强 烈 的 吸 收 ， 最大吸收峰为 226 nm ， 符合胶原蛋白通常的紫 外吸收特性 ， 即存在胶原蛋白的特征吸收峰 。2. 5胶原蛋白提取中酶解时间的确定 20 ℃ 酶添加量为 5 mg / mL， 底物浓度为 4% ，反应， 每隔 4 小时取样 0. 5 mL 置于 1 ～ 5 号安瓿 瓶中， 加 1 mL 6 mol / L HCl， 在 130 ℃ 下水解 3 h， 水解液稀释 100 倍后测定 Hyp。 由图 4 可知， 随 着时间的延长， 水解液的吸光度值依次增加， 表明 12 h 后的吸光 溶出的胶原蛋白含量在不断增加， 度增幅明显减缓， 从节能上考虑， 提取时间可定为 12 h 左右。图5 Fig. 5裙边胶原蛋白的紫外扫描图谱UV scanning spectra of calipash collagen2. 8SDSPAGE 凝胶电泳 裙边胶原蛋白的凝胶电泳结果见图 6 所示。图4 Fig. 4酶解时间对吸光度的影响 and absorbance从凝胶电泳图谱上可以清晰地看到有染色较深的 3 条带（ 左右为同一样品） ， 几乎不含其它杂带， 表 从上 明所提取的裙边胶原蛋白得到了高度纯化， α1 链， α2 链。 到下依次为： β 链，Relation between the hydrolysis duration6期陆剑锋， 等： 中华鳖裙边胶原蛋白的提取及其特征4 表 3 L9 （ 3 ） 正交分析 Tab. 3 L9 （ 3 4 ） analysis985试验号 test number 1 2 3 4 5 6 7 8 9 K1 K2 K3 k1 k2 k3 极差 range 因素 主→次 major→minor order 优方案 optimal programA 1（ 6） 1 1 2（ 4） 2 2 3（ 5） 3 3 256. 691 3 263. 102 6 255. 580 6 85. 563 8 87. 700 9 85. 193 5 2. 507 4B 1（ 5） 2（ 4） 3（ 6） 1 2 3 1 2 3 256. 200 2 266. 861 0 252. 313 3 85. 400 1 88. 953 7 84. 104 4 4. 849 3空列 blank 1 2 3 2 3 1 3 1 2 251. 679 3 267. 084 5 256. 610 7 83. 893 1 89. 028 2 85. 536 9 5. 135 1 CBA C 2 B 2 A2C 1 （ 12 ） 2 （ 14 ） 3 （ 10 ） 3 1 2 2 3 1 265. 744 0 269. 312 0 240. 318 5 88. 581 3 89. 770 7 80. 106 2 9. 664 5提取率（ % ） extraction rate 84. 980 1 94. 858 1 76. 853 1 83. 777 1 92. 314 6 87. 010 9 87. 443 0 79. 688 3 88. 449 3提取胶原蛋白质量 × 100 。 裙边胶原蛋白总质量 weight of extracted collagen protein Notes： extraction rate（ % ） = . total weight of calipash collagen protein 注： 提取率（ % ） =分析图谱上会出现一个吸热峰， 这个峰值对应的 ［ 15 ］ 。 由图 7 温度即为该样品的热变性温度 （ T d ） 可知，裙 边 胶 原 蛋 白 的 热 变 性 温 度 （ T d ） 为32. 33 ℃ 。Tab. 4 表 4 裙边胶原蛋白的氨基酸组成 Amino acid composition of calipash collagen氨基酸比例（ % ） percentage 5. 18 2. 27 3. 76 9. 27 26. 25 8. 36 1. 35 3. 95 1. 84 1. 51 2. 80 0. 00 2. 91 3. 02 0. 75 7. 85 13. 95 0. 29 7. 30氨基酸种类 kinds of amino acids图6 Fig. 6裙边胶原蛋白的电泳图谱SDSPAGE pattern of calipash collagen2. 9氨基酸分析裙边胶原蛋白的氨基酸组成见表 4 所示。 其 中甘氨酸 （ Gly ） 含量最为丰富， 高达 26. 25% ， 亚 氨基酸包括羟脯氨酸 （ Hyp ） 和脯氨酸 （ Pro ） 总含 Pro 的羟基化程度接近 35% ， 谷氨 量为 21. 25% ， 酸（ Glu） 、 丙氨酸 （ Ala ） 和精氨酸 （ Arg ） 含量也较 高， 几乎不含或仅含极少量的酪氨酸 （ Tyr ） 、 色氨 酸（ Trp） 、 组氨酸 （ His ） 、 蛋氨酸 （ Met ） 、 半胱氨酸 （ Cys） 。 2. 10 热变性温度的测定 裙边胶原蛋白差示扫描量热（ DSC ） 结果见图 7 所示。通常当达到蛋白质热变性温度时， 在热天冬氨酸 Asp 苏氨酸 Thr 丝氨酸 Ser 谷氨酸 Glu 甘氨酸 Gly 丙氨酸 Ala 半胱氨酸 Cys 缬氨酸 Val 蛋氨酸 Met 异亮氨酸 Ile 亮氨酸 Leu 酪氨酸 Tyr 苯丙氨酸 Phe 赖氨酸 Lys 组氨酸 His 精氨酸 Arg 脯氨酸 Pro 色氨酸 Trp 羟脯氨酸 Hyp986水产学报［ 9］34 卷占总蛋白的 48% 以上； Takeshi 等报道了日本鲈鱼骨、 鱼鳍等废弃物中的胶原蛋白含量， 鱼鱼皮、 49. 8% 、 41. 6% 。 与鱼类胶原蛋 分别为 51. 4% 、 白相比较， 中华鳖的裙边胶原蛋白含量非常丰富 ， 今后可开发利用的潜力巨大。 本实验表明， 在酸 性条件， 胃蛋白酶添加量为 4 mg / mL， 底物浓度为 4% ， 提取时间为 14 h， 中华鳖裙边胶原蛋白提取图7 Fig. 7 裙边胶原蛋白热变性曲线率可达到最高。 对裙边胶原蛋白样品的紫外扫描图谱检测， 显示其在 226 nm 处存在一个很强的吸收峰， 符合 胶原蛋白通常的紫外吸收特性， 这个吸收峰主要* * 是由 C = O 的 N → π 和 N → σ 跃迁产生的强吸Thermal denaturation curve of calipash collagen2. 11傅立叶变换红外扫描图谱裙边胶原蛋白的傅立叶变换红外扫描 （ FT10］ IR） 结果见图 8 所示。根据已报道的资料［ ， 我们－1 可以推知： 3 334. 32 cm 处的强吸收是由酰胺 A N―H 伸缩振动的吸收 的 N―H 伸缩振动引起的， －1 峰通常出现在 3 400 ～ 3 450 cm ， 但其形成氢键 后， 吸收峰对应的波数会下降， 实验表明存在 N―H收［ 18 ］。一般具有共轭双键的物质都具有紫外吸收特性， 在 20 种常见的基本氨基酸中， 芳香族氨 Tyr、 Trp 和杂环族氨基酸 His 均含有共 基酸 Phe、 它们在 250 ～ 290 nm 的波长范围存在明 轭双键， 显的紫外吸收峰［ 2］伸缩振动与氢键的缔合体； 酰胺 B 出现在3 087. 48 cm － 1 ， 这个弱吸收峰是由 C―N 伸缩振动引起的特 这也是酰胺 B 在红外波谱扫描中常出现 征吸收峰， －1 的波长； 酰胺 Ⅰ 带出现在 1 660. 41 cm 处， 它是由 O 伸缩振动引起的， 其 蛋白质多肽骨架中的 C －1 吸收峰最强； 1 558. 20 cm 是酰胺Ⅱ带的特征吸收 峰， 它是由 C―N 伸缩振动与 N―H 弯曲振动引起 －1 它是由 N―H 的； 酰胺Ⅲ带出现在1 240. 00 cm ， 弯曲振动引起的特征吸收峰。酰胺 Ⅰ 带和蛋白质的 二级结构有关， 而酰胺Ⅲ带证明了提取的裙边胶原 蛋白存在完整的三螺旋结构［ 16］。 其中 Trp 在 280 nm 处的紫外吸收能力最强， 所以多数蛋白质在 280 nm 处有 因此测量 280 nm 处的紫外吸光 一个强吸收峰， 度， 可对蛋白质溶液进行定量分析； 但由于胶原蛋 白中几乎不含 Trp， 所以在 280 nm 处不会出现强 这已成为鉴定胶原蛋白纯度的一种方 吸收峰， 法［ 19 ］。在本实验中， 除了存在胶原蛋白的特征吸收峰外， 仅在 260 ～ 280 nm 处出现一个极微弱的 其余波长范围 峰（ 可能是由少量的 Phe 所引起 ） ， 因此裙边胶原蛋白的紫外 均没有明显的吸收峰， 扫描图谱表明其杂蛋白含量较少 ， 纯度极高。 胶原蛋白通常由 3 条多肽链组成 （ 呈三螺旋 结构） ， 这些链被称为 α － 链。有的胶原蛋白分子 另 1 条链不 中的 α － 链都相同； 有的 2 条链相同， 同； 而有的 3 条 α － 链都不同［ 1 － 2］。。 从 SDSPAGE凝胶电泳图谱可知， 裙边胶原蛋白几乎不含杂带， 纯度极 高 （ 与 紫 外 扫 描 图 谱 分 析 的 结 果 十 分 吻 合） ， 至少含有两条不同的 α － 链， 分别为 α1 － 链 另一条为 β 链， 这与已报道的硬骨鱼 和 α2 － 链，图8 Fig. 8 裙边胶原蛋白的傅立叶红外转换扫描图谱 Fourier transform infrared spectrum of calipash collagen类鱼皮Ⅰ型胶原蛋白的凝胶电泳结果一致 蛋白。Takeshi 等［ 22 ］［ 20 － 21 ］，因此中华鳖裙边胶原蛋白也属于典型的 Ⅰ 型胶原 认为某些硬骨鱼类鱼皮的 Ⅰ 型胶原蛋白中可能还含有 α3 链， 但电泳时 α3 链 通常不能 （ 或很难 ） 与 α1 链分开， 本实验也未观［ 17 ］3讨论本文检测了中华鳖的基本营养成分， 裙边胶原蛋白含量高达 60. 87% （ 干基 ） 。 秦玉青等IR 察到有类似的 α3 链条带出现。 此外通过 FT图谱分析， 进一步证明纯化后的裙边胶原蛋白保 存有完整的三螺旋结构。测定了鱿鱼皮的胶原蛋白， 其含量达到 36. 7% ，6期陆剑锋， 等： 中华鳖裙边胶原蛋白的提取及其特征 ［ J］ . 食品工业科技， 2007 ， （ 7 ） ： 194 － 202.987由裙边胶原蛋白的氨基酸组成分析可知， 裙 其次为亚氨基 边胶原蛋白中 Gly 含量最为丰富， 酸（ 包括 Hyp 和 Pro ） ， 但几乎不含或含极少量的 Trp、 Tyr、 Cys、 His 等， 以上这些基本特征均符合典 型的Ⅰ 型胶原蛋白［ 21 ， 23 ］［ 8 ］ 伍惠生. 鳖的营养价值与抗癌作用［ J］ . 河南水产， 2002 ， （ 2 ） ： 21 － 24. ［ 9 ］ Takeshi N， Nobutaka S. 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Compared with collagen from land animals（ such as pig， cow ） ， aquatic collagen has drawn extensive attention for its excellent physiochemical properties and physiologically active functions. Chinese softshelled turtle（ Pelodiscus sinensis ） is a rare and precious traditional aquatic animal in China. It has a high medicinal and nutritional value with plenty of calipash collagen. The collagen from calipash of P. sinensis was extracted by pepsin digestion under acid condition. The effects of pepsin addition， substrate concentration and extraction time on yield of collagen were investigated. 5 mg / mL pepsin addition， 4% substrate concentration and 14 hours extraction time were established as optimal conditions for preparing calipash collagen. The extracted crude collagen was purified by salt precipitation and dialysis，and then its biochemical characterization was determined by the methods of SDSPAGE ， DSC ， UV and FTIR scanning. The result indicated that the extracted calipash collagen was of high purity and belonged to typical collagen Ⅰ with two α and one β chains. It can be assumed that the calipash collagen of P. sinensis might be a useful substitute for porcine and bovine collagens. This study laid a scientific foundation for further exploitation and utilization of the calipash collagen polypeptide of Chinese softshelled turtle. Key words： Pelodiscus sinensis； calipash； collagen； extraction； purification Corresponding author： LU Jianfeng. Email： lujf@ sibs. ac. cn
?会讯?关于召开 2010 年中国水产学会学术年会的预备通知2010 ］ 29 号 农渔学［各有关单位、 学会各分支机构： 为加强全国水产科技工作者的学术交流， 促进渔业和谐、 健康发展， 我会定于 2010 年 10 月 20 日 － 22 日在陕西省西 安市唐城宾馆召开 2010 年中国水产学会学术年会 。现将有关事宜通知如下： 一、 年会主题： 低碳 三、 论文征集： 1、 征集范围： 水产及水产相关的研究 、 生产及应用领域的论文 。范围包括水产养殖技术与品种繁育 、 水产动物营养 与饲料、 水产病害与防控、 渔业资源与渔业管理、 渔业行为与生态变化、 水族观赏与休闲渔业、 水产品加工与制冷、 渔业机 械与工程、 渔业经济与信息、 渔业科研、 教育、 生产与行政管理等。 2、 论文所反映的信息和学术成果须是 2007 年 － 2010 年完成的， 请作者确保论文内容的真实性和客观性， 文责自负。 3、 论文一律由年会网站（ www. csfish. org. cn / . nianhui2010 ） 提交， 上传提交截止时间为 2010 年 9 月 10 日。 责任 科技推动产业转型升级 二、 年会安排： 开幕式邀请著名专家做大会主题报告 。大会报告后分分会场进行专题报告及交流 。中国水产学会二○一○年五月十六日
中华鳖的生态养殖特点_农林牧渔_专业资料。中华鳖的研究工作始于上世纪 70 年代...裙边的胶原 四肢沉积的脂肪少,肌内脂肪、胆 固醇的含量、脂肪的碘值和裙边的...鳖业和养鳖技术进行考察,引进了具有生长快、裙边厚...由于有上述特点,我区中华鳖日本品系品种在养鳖业中...通过生物技术,将富含胶原蛋白的裙边制成高含量的胶原...签名: 周晓辉 2016 年 4 月 28 日 附件 1:外文资料翻译译文响应面优化蛋壳膜中胃蛋白酶溶性胶原蛋白提取工艺 关键词: 蛋壳膜、响应面优化法、胃蛋白酶溶性胶原...文章简述 了鱼鳞的结构特点,介绍了目前对鱼鳞胶原蛋白的提取方法 摘要:人口、资源和环境是当前全球性的重大问题,加强对水产品的废弃物鱼 鳞的加工利用和实现渔业...在食品加工中, 应用精制活性胶原蛋 白和高浓缩胶原蛋白质模拟食品, 口服给人体...能力强, 能够更好、 更便捷的获得声能一直是超声波优于其他提取技术的特点。 ...胶原蛋白的提纯 探索一个简要的胶原提纯方法,比较提取不同来源的胶原蛋白 的物理化学特性,利用影像法探讨胶原纤维体外生长聚合三维构建过程和特征,为生物医学 工程的...食品系食品营养与检测专业 2014 级?食品营养?课程论文 胶原蛋白的生理功能特性及其应用 摘要胶原蛋白是一种多糖蛋白,含有少量的半乳糖和葡萄糖,是细胞外基质的主要...胶原蛋白的特性及其应用赖娜桐 (四川大学轻纺与食品) [摘要]近年来, 随着胶原提取技术的发展以及对胶原蛋白与胶原多肽的功能性质 认识的提高, 胶原蛋白的研究与应用...(市) 生态甲鱼养殖特点河洲生态甲鱼一上市就得到...胶原蛋白丰富,口感粘合力强 3 生态甲与温室甲鱼的...温室养甲鱼的裙边较薄,易垂落;生态放养甲鱼的裙边...动 物实验表明,龟板具有抑制小鼠 S180、艾氏腹水瘤和腹水型肝癌的 作用,还具有增强机体免疫功能的作用; 甲鱼腹部(肚皮)的软肉和裙边一样含有丰富的胶原蛋白; ...
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