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踢爆“307亿元工程内标”骗局（三）
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内容简介：踢爆“307亿元工程内标”骗局（三）
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&&&关于内标法的做标准曲线以及对内标法计算的一点心得
　　这是之前有网友QQ上找我的问题：
　　网友提问：刚接触色谱这块，对内标法不是太了解，想请教一下论坛的朋友们关于内标法做标准曲线时，纵坐标和横坐标分别为什么?我看到关于纵坐标一般都是响应值之比，横坐标有些说是待测浓度，有些说待测浓度和内标的比值，请问大家这两种哪一种是正确的?谢谢!
　　我觉得这块有些新手估计不是很懂，因此呢把自己总结的一些经验和大家分享下。
　　内标法给人的印象总是让人头疼，何时选用内标法，如何选择内标物质，结果怎么计算，公式该如何理解，都是问题。
　　被问到过内标法的定量依据是什么，也就是在内标法里内标和待测物之间是什么关系。当时有点晕，说待测物和内标的比是一定的。到底是什么的比一定呢?你清楚吗?
　　在此，撇开大家谈论过很多的内标法如何应用的问题，来谈谈内标法的计算。
　　先来分清两个概念，绝对校正因子和相对校正因子。以色谱分析为例，绝对校正因子是单位峰面积所相当的物质量，fi&=mi/Ai。而相对校正因子是某一组分与标准物质的绝对校正因子之比，f= fi&/ fs&=As&mi/Ai&ms。在内标法中，绝对校正因子主要由仪器的灵敏度决定，并且不易准确测量，也无法将内标物和待测物联系起来;而相对校正因子才是定量的基础，也是前文中提及的问题的答案，相对校正因子是那个一定的量，所谓待测物与内标的比一定也就是说待测物的质量与峰面积之比(即绝对校正因子fi&)和内标物的质量和峰面积之比(fs&)的比值一定(话比较绕，结合公式就一目了然啦)。文献上，标准上看到的校正因子也都是相对校正因子。相对校正因子也可以通过已知量的标准和内标混合后经实验测定获得。
　　对相对校正因子的公式进行简单变形，就能够得到待测物质量mi=Aifi&/Asfs&*ms=，进而通过C=mi/m得到待测物的浓度。
　　因此，再见到各类内标计算公式，我们就能够分辨其中的f到底是相对校正因子还是绝对校正因子了。比如
里，fi、fs就是指绝对校正因子。
　　而为了避免测定校正因子，常采用内标标准曲线法。它以mi= ms*fi*Ai /(fsAs) 为基础，但有一个前提是加入恒定量的内标物，且进样量相同(ms同)，这样待测组分的含量就与Ai/As成正比了。mi=Ai/As*常数。
　　绘制内标标准曲线，先将待测组分的纯物质配成不同浓度的标准溶液，分别取一定量的标准溶液，加入相同量的内标物，混合后进样分析，测出Ai和As，以 Ai/As为纵坐标，以标准溶液的浓度为横坐标作图。分析待测试样，取与标准溶液相同量的待测试样和内标物，测出峰面积比，由标准曲线即可查出待测组分的含量。
　　利用内标标准曲线法定量，可以免去测定校正因子的麻烦，也可以减少与查阅到的校正因子仪器条件等不同造成的差异，适用于液体试样的常规分析。
　　总结起来有2点。一是在内标法中只有相对校正因子，也就是待测物与内标物的绝对校正因子的比值是一定的。二是内标标准曲线法能够避免测定校正因子，但使用上有一些限制。
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我现在也在用内标法做标准曲线，一头的雾水，如果内标加的量不一样，要怎么校正码？？？？
横坐标是被测物质和内标物的浓度比，纵坐标是被测物质和内标物的面积比
不错，学习了
多谢楼主分享，赞一个
其实，不管怎样能算出浓度就行，所以横坐标是浓度最合适
　　1 前言
　　内标法是经典的色谱定量方法，在配制分析样品时要求加入一个或数个内标物组份，内标物必须是分析样品中不含有的组份，而且要求与样品中的其它组份有良好的分离。由于受分离因素制约，很多情况下给内标物的选择带来不便，有时甚至无法选到合适的内标物。鉴于这种情况，我们尝试将内标法与叠加法相结合成为一种新的定量方法，称为叠加内标法，用于没有合适内标物的场合。
　　2 叠加内标法定量原理
　　已知某样品中含有k，i，x三个组份(可以有更多的组份，x1，x2，x3......)，命名k组份为峰面积校正组份，i组分为叠加内标组份，x组分为任意组份，样品经色谱分离后得到三个组份的峰面积分别为Ak，Ai，Ax，上述三个组份相对于i组份的校正因子分别为Fki、1.000和Fxi，样品中三个组份的含量分别为Ck、Ci和Cx。现分别准确称取m克样品和Ws克i组份，然后将二者混合，混合物称为加标样品。加标样品经色谱分离后得到三个组份的峰面积分别是：k组份峰面积为A1，i组份峰面积为A2(A2是样品中原有的i组份和加入的叠加i组份共同构成的峰面积)。x组份或其它组份峰面积与计算无关。求样品中各组份百分含量的步骤如下：
　　2.1 利用k组份进行峰面积校正
　　令k组份加标后与加标前的峰面积的比值为K(k组份加标后与加标前的峰面积在理论上是相同的，此处引入校正系数K的目的是为了消除进样量误差)，则K的表达式为：
　　K = A1/Ak (1)
　　再利用K对加标前的k，i，组份的峰面积进行修正如下：
　　A = K&Ak (2)
　　B = K&Ai (3)
　　式(2)、式(3)中的K为加标后与加标前的两次进样的峰面积校正系数，虽然K是从组份k得到的，但亦适合其它组份。A和B分别为Ak和Ai的校正值。
　　2.2 引入叠加法
　　引入叠代法的计算公式：
　　W=Ws&A0/(Ah-A0) (4)
　　在式(4)中，W 表示样品中原有内标物组份的重量;Ws表示加入的那部分内标物组份的重量;A0表示样品中原有内标物组份的峰面积;Ah 表示加标后内标物组份总的峰面积。
　　在本文中，A2相当于Ah，B相当于A0，W与Ws含义不变，因此有：
　　W = B&Ws/(A2-B) (5)
　　将式(1)及式(3)代入式(5)可得式(6)
　　W = (A1/Ak)&Ai&Ws/ (6)
　　式(6)又可写成：
　　W = A1&Ai&Ws/(Ak&A2-A1&Ai) (7)
　　2.3 引入内标法
　　引入内标法计算公式：
　　Cx=(Ax/As) &Fxs&100&W/m (8)
　　式(8)中，Cx为样品中x组份的含量;W为样品中原有内标物组份s的重量;m为样品的重量;Fxs为被测组份x相对于内标物组份s的校正因子;Ax 、As分别为组份x和内标物组份s的峰面积。
　　在本文中，叠加内标组份i相当于式(8)中的内标物组份s，其它各项意义相同，因此可导出叠加内标法定量计算公式：
　　Cx = (Ax/ Ai)&Fxi&100&W /m (9)
　　2.4 综合结论
　　综合2及3中的结论式(7)和式(9)可得叠加内标法定量计算公式：
　　Cx = Ax&Fxi&100&A1&Ws/ (10)
　　3 叠加内标法与叠加法和内标法的比较
　　3.1 优点
　　与内标法比较：
　　(1)叠加内标法的内标物可以是被测样品中已有的组分，因此，不必考内标物的分离问题，可以选择样品中分离良好的任一组分为内标物;
　　(2)用于没有合适内标物的场合。
　　(3)对进样量准确性要求不严格。
　　与叠加法的比较：在叠加法中，一次加入只能测定一个组份，在对多组份样品进行测定时需要多次加入和多次进样;而叠加内标法只需要一次加入和两次进样即可以同时测定多个组份。
　　3.2 缺点
　　与内标法比较：需两次进样，即分别测量一次样品和加标样品。
　　与叠加法比较：在测定内标物以外的组份时需要知道该组分的校正因子
你是疯子，我是傻瓜，疯疯癫癫走天涯
对内标发来说，选择一个合适的内标物是最麻烦的！
一直以来&&内标法一直是个很难啃
解释得很详细,谢谢!
讲述的很详细，提问的也很关键。
学习一下，一直没有用过内标法。前几天好好的计算了一下，终于懂了。
谢谢分享资料
感谢提供资料。
感谢提供资料。
作者讲的还是比较透彻的，顶
作者讲的还是比较透彻的，顶
内标法对进样技术要求低应该也是一个优点
内标法对进样技术要求低应该也是一个优点&& 查看话题
关于内标法测样品浓度的问题
关于内标法测得样品中所求物质的浓度，我之前的理解是内标物s和样品i，（Ai/As)样品/(Ai/As)标准=（Ci%)样品/(Ci%)标准，画出了标准曲线，就可以知道未知样品的浓度了。
但是我现在在配置溶液中有些疑惑。1.内标物是加入样品中一起稀释后进样；2.内标物单独配置成已知浓度的溶液，再加入已知浓度的样品中，但是这样的话，两种物质一混合，原先的各自的浓度都发生了变化，那计算时，是否就要重新计算各自浓度后再代入公式计算？这样就比较麻烦了吧~但是我看其他论文，感觉他们都是单独配置了一定浓度的内标液的。
&&那是用哪种方法比较好呢？
还有浓度的变化，是将内标物的浓度呈梯形变化，然后保正样品的浓度不变；还是将样品浓度梯形变化，保证内标物浓度不变？ 一般内标法会保证内标浓度保持同一水平，变化样品浓度来做标准曲线，最后通过标准曲线计算样品浓度的。你上面给出的公式相当于标准曲线法的简化了。看你的两种方法我没太明白，我感觉都要重新计算浓度再计算啊。 内标法：我们的操作步骤是保持内标物浓度不变的，一般是样品稀释定量，之后统一加入一定量的内标物！ : Originally posted by xxaijwd at
一般内标法会保证内标浓度保持同一水平，变化样品浓度来做标准曲线，最后通过标准曲线计算样品浓度的。你上面给出的公式相当于标准曲线法的简化了。看你的两种方法我没太明白，我感觉都要重新计算浓度再计算啊。 上面的两种方法我是配溶液时想到的；1.将内标和样品去一定量后混合，再共同稀释，比如5μL的乙醛和5μl的甲醛混合后，稀释到100ML；假如甲醛为内标的话，后面的样就是10μL的乙醛和5μl的甲醛混合，再稀释到100ML，之后是15和5，,20和5……以此类推；2.单独配置5μL/L的甲醛溶液，再配置5μL.L，10μL/L……的乙醛溶液，再给自取一定量混合，这样的话混合溶液中甲醛含量就不在是5μL/L了，乙醛也不是5,10,15μL/L了，这样乙醛，甲醛的浓度要再重新计算后，才能代到上面的公式中去吧？ 建议你还是将样品和内标液都配制储备液，然后在同一瓶中同时稀释，这样浓度不会错了。 : Originally posted by xiaobolala at
上面的两种方法我是配溶液时想到的；1.将内标和样品去一定量后混合，再共同稀释，比如5μL的乙醛和5μl的甲醛混合后，稀释到100ML；假如甲醛为内标的话，后面的样就是10μL的乙醛和5μl的甲醛混合，再稀释到100M ... 不好意思，这几天没上小木虫……我一般是按照第一种方法做的，但是这样公式中C就要变成m了。因为虽然稀释到相同的体积，但乙醛加的量不一样嘛。下面的方法原则上也可以，不过同样需要体积折算。 我总觉得外标更准确一点，个人建议，还是外表做一下看结果，做个对比哦！纯属个人观点！ : Originally posted by xxaijwd at
不好意思，这几天没上小木虫……我一般是按照第一种方法做的，但是这样公式中C就要变成m了。因为虽然稀释到相同的体积，但乙醛加的量不一样嘛。下面的方法原则上也可以，不过同样需要体积折算。 公式中的C一定要变为M么，因为是μL，我可以近似的看成μg么？那这样不直接变为了单位μg/l，就是浓度单位了~ : Originally posted by xxaijwd at
不好意思，这几天没上小木虫……我一般是按照第一种方法做的，但是这样公式中C就要变成m了。因为虽然稀释到相同的体积，但乙醛加的量不一样嘛。下面的方法原则上也可以，不过同样需要体积折算。 因为加入要换算成M的话，还要知道两种物质的密度，我现在不知道他们的密度啊~ 内标法比外标法更准确。同意3楼4楼的观点。 : Originally posted by xiaobolala at
公式中的C一定要变为M么，因为是μL，我可以近似的看成μg么？那这样不直接变为了单位μg/l，就是浓度单位了~ 当然不行啊，C乘以V不就是质量了吗，我晕…… : Originally posted by xxaijwd at
当然不行啊，C乘以V不就是质量了吗，我晕…… 因为我当时配溶液的时候配的是μl/l，所以…… : Originally posted by xiaobolala at
因为我当时配溶液的时候配的是μl/l，所以…… 那公式就还用C，重新折算下体积。 这个 你怎么配制也行 ，最后你能搞清楚样品和内标的浓度即可。博彩专家：亿万先生&就是一个网络大骗局 - 110网免费法律咨询
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博彩专家：亿万先生&就是一个网络大骗局
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