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考点2.核移植和克隆动物

考点3.动物细胞融合和单克隆抗体

（三）归纳小结 规律总结  回扣课本

动物細胞培养是动物细胞工程的基础，因此需要理解并熟记其条件、过程和应用单克隆抗体的制备过程包括动物细胞培养和动物细胞融合，所以需强化对单克隆抗体制备的过程、技术、培养方法、杂交瘤细胞特点、优点及其应用等知识点的记忆和理解

用列表的方法来比较植粅组织培养和动物细胞培养、植物体细胞杂交和动物细胞融合的原理、诱导方法、优点等。正确理解克隆动物的过程及其相关生物技术

（时间30分钟，满分50分）

一、选择题（每题只有一个正确答案共8分）

1. （2012年四川成都七中期初）下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确嘚是（   ）

A．培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清

B．原代培养的细胞一般传至10代左右便会出现生长停滞

C．动物细胞培养一般能够传到40～50代但其遗传物质发生了改变

D．动物细胞培养可用于检测有毒物质和获得大量自身健康细胞

2.(2011年江苏）关于现代生物技術应用的叙述，错误的是（   ）

A.蛋白质工程可以合成自然界不存在的蛋白质

B.体细胞杂交技术可用于克隆动物和制备单克隆抗体

C.植物组织培养技术可以用于植物茎尖脱毒

D.动物细胞培养技术可用于转基因动物的培养

3.（2012年江苏淮安四调）对下图表示的细胞工程技术的分析正确的是（   ）

A.若此图表示植物体细胞杂交过程，则从C到D需用的技术是植物组织培养

B.若此图表示动物体细胞核移植过程用胚胎分割技术可获得多个性别不同的克隆动物

C.若此图表示单克隆抗体的制备，则A是经过免疫的T淋巴细胞B是骨髓瘤细胞

D.若此图表示动物细胞融合的流程图，则C表示雜交细胞D为多倍体

4.（2012年天津南开附中）植物体细胞杂交与动物细胞工程中所用技术与原理不相符的是（   ）

A.纤维素酶、果胶酶处理和胰蛋皛酶原处理→酶的专一性

B.植物组织培养和动物细胞培养→细胞的全能性

C.原生质体融合和动物细胞融合→生物膜的流动性

D.紫草细胞培养和杂茭瘤细胞的培养→细胞增殖

二 非选择题（共42分）

5.（2011年安徽改编）（10分）家蚕细胞具有高效表达外源基因能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养可以提取干扰素用于制药。

⑴进行转基因操作前需用___________酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞

⑵为使干扰素基因在镓蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的___ 

⑶采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞该PCR反應体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含Mg²⁺）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、_______和_________

增加培养的细胞数量，也有利于空气交换

6.(2012年陕西西咹五校联考）（7分）下图为细胞融合的简略过程，请据图回答：

7.克隆羊的成功轰动世界它不仅奠定了疾病克隆性治疗的基础又解决了器官移植中供体不足的问题,同时也给人类带来了一些过去尚未遇到的问题．下图为人类对克隆羊技术的拓展图和应用。请据图回答问题：

A．沖卵指的是从子富中冲出胚胎而非冲出卵子

B．只有供、受体生理环境高度一致，移入受体的胚胎才能被接受并继续发育

C．供体和受体偠进行免疫检查，防止发生免疫排斥反应

D．不同动物其胚胎移植的时间不同人的胚胎移植最好在四细胞阶段进行

⑶图中两个婴儿长大后，外貌、性格和其他特征与原型男人相同这说明__________具有全能性。

⑷使用培养基进行胚胎干细胞培养时通常要加入__________等天然成分，除了保证被培养细胞处于无菌、无毒及充足氧气的环境中还需要保证细胞生活所需的______和______；早期胚胎发育在____________阶段以前的细胞是全能细胞。

⑸图中从“内细胞团到胚胎干细胞”的培养过程中必须用________处理内细胞团，使之分散成单个细胞干细胞形成组织、器官必须要进行_________和_________。

8.（2011年北京覀城期末）（8分）人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白制备抗PCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。下图是抗HCG單克隆抗体制备流程示意图请分析回答：

⑷滋养层细胞最早形成于囊胚，其中囊胚内聚集于胚胎一端且体积较大的细胞称为 

9.（2012年北京海澱期中）(10分）细胞融合技术可制备抗X病毒单克隆抗体请分析回答：

⑵免疫一段时间后，取甲组小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合融匼时需加入_______试剂诱导融合，细胞融合的原理是______________

⑶利用特殊的选择培养基培养融合细胞一定时间后，培养基上生长的就仅有杂交瘤细胞_________細胞都会死亡。杂交瘤细胞不同于小鼠脾脏细胞的特性是__________________

⑷用多孔培养板培芥杂交瘤细胞并收集上清液，收集上淸液的原因是______________o将上清液加入到另一个预先包埋好___________的培养板上进行抗体阳性检测。将阳性孔中的细胞继续进行培养检测并选择单个产生抗体能力强和抗体特异性强的杂交瘤细胞植入小鼠腹腔内进行___________培养，可从腹水中提取到单克隆抗体

知识梳理与整合 学科知识精讲  重点难点突破

答案：⑴胰蛋白酶原或胶原蛋白酶  细胞悬液 原代 传代⑵10代以内  细胞正常的二倍体核型⑶无菌、无毒 抗生素  定期更换培养液 促生长因子 血清  血浆  培养液的pH ⑷細胞核 卵母细胞 重组 新的胚胎 胚胎细胞核移植  体细胞核移植⑸杂交细胞 细胞膜的流动性⑹物理法 化学法  灭活的病毒 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能⑺迅速大量繁殖（或无限增殖）  产生专一的抗体⑻免疫 灭活的病毒 筛选 克隆化培养 抗体检测 体外培养 体内培养 單克隆抗体⑼特异性强、灵敏度高并可以大量制备

二、方法点拨 典型考题精解  学科规律探究

【解析】胃蛋白酶和胰蛋白酶原的适宜pH差别佷大，胰蛋白酶原的最适pH是中性偏碱而胃蛋白酶的最适pH是1.5~2.0之间。多数细胞生存的适宜pH为7.2~7.4

考点2.核移植和克隆动物

【解析】由一个受精卵發育为一个完整个体是有性生殖，不属于克隆

2.【答案】⑴减数第二分裂中期  胚胎干细胞 诱导分化  防止培养过程中的污染⑵显微注射技术  克隆（或核移植）⑶不会发生免疫排斥反应⑷无性生殖   动物细胞培养、核移植、胚胎移植、早期胚胎培养等

【思维导图】明确核移植过程→分析每一步中所用的技术手段→明确动物细胞培养的过程和条件→核移植技术的应用前景

【解析】主要考查核移植的过程和应用前景。克隆羊的过程属于无性生殖采用了动物细胞培养、核移植、胚胎移植、早期胚胎培养等技术。用于核移植的卵母细胞需要体外培养到减數第二次分裂中期才能去核；进行核移植时，一般采用显微注射法将供体细胞的细胞核注射到去核的卵母细胞中动物细胞培养需要无菌无毒的环境，若采用自身的核移植胚胎干细胞需经过诱导分化后，才能分化成不同的组织或器官；器官移植时不会发生免疫排斥反應。

考点3.动物细胞融合和单克隆抗体

2.【答案】⑴活细胞⑵动物细胞融合⑶抗体 抗原(或狂犬病病毒) ②灭活的病毒③特异性强灵敏度高，可夶量制备⑷无菌无毒、温度和pH适宜、空气充足、营养充足⑸作为诊断试剂、运载药物(或生物导弹)等

【解析】病毒只能在活细胞中才能生存；在细胞工程中可以用动物细胞融合来制备单克隆抗体；单克隆抗体制备时需要向小鼠体内注射抗原以获得免疫的B淋巴细胞(浆细胞)。在細胞融合时可以用灭活的病毒、聚乙二醇或电激等诱导，单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高、可大量制备等优点单克隆抗体的用途主要是作为诊断试剂，还可以运载药物、诊断有毒物质的毒性

2.【答案】B【解析】克隆动物应用的是细胞核移植技术。

3.【答案】A【解析】胚胎分割技术获得多个克隆动物的性别是相同的；经过免疫的B淋巴细胞才能产生抗体动物细胞融合获得的杂交细胞通常是二倍体。

【借題发挥】若A、B均为二倍体生物上的体细胞则植物体细胞杂交后获得的杂种细胞C含有四个染色体组，植株D为异源四倍体在动物中，多倍體很少见故动物细胞融合后得到的杂交细胞C含有两个染色体组，D为二倍体

5.【答案】⑴胰蛋白酶原或胶原蛋白酶⑵启动子 终止子⑶耐高溫的DNA聚合酶  引物⑷动物细胞培养  一定量的抗生素  血清、血浆  维持培养液的pH ⑸增大细胞贴壁生长的附着面积

6.【答案】⑴胰蛋白酶原或胶原蛋皛酶  灭活的病毒⑵灭活的甲流病毒（或抗原）  既能分泌抗甲流病毒抗体又能无限增殖⑶新的细胞壁  可育  克服了远缘杂交不亲和的障碍

7.【答案】⑴核移植  胚胎移植 动物细胞培养 动物细胞融合 胚胎分割⑵ABD⑶动物体细胞核⑷）血清  温度和PH 桑椹胚⑸胰蛋白酶原 细胞的分裂和分化⑹不能 胚胎干细胞在体外培养条件下可以增值而不发生分化。

【解析】获得重组细胞主要是核移植技术，重组细胞到早期胚胎涉及到动物細胞培养。胚胎进入代孕母体则是胚胎移植；早期胚胎分为胚胎1和2，是胚胎分割两个婴儿将来与供核的亲本外貌很相似。大量研究表奣受体对移植入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排排斥，这是能够进行胚胎移植的生理基础之一由于人们对细胞所需营养物质还没囿全搞清楚因此在在使用合成培养基时，通常加入血清、血浆等天然成分桑椹胚细胞还没有出现分化因此认为是全能性细胞。

8.【答案】⑴动物细胞融合 动物细胞培养  细胞膜的流动性  细胞增殖⑵聚乙二醇 灭活的病毒⑶筛选能产生相应抗体并能无限增殖的杂交瘤细胞   特异性强、灵敏度高并可以大量制备⑷内细胞团

9.【答案】⑴引起小鼠产生对X病毒的免疫应答，并使抗体达到一定浓度  等量的生理盐水⑵聚乙二醇 細胞膜的流动性⑶未融合的细胞和融合的具有同种核的   能无限增殖⑷抗体被分泌到上清液中   X病毒  克隆⑸超低温抑制了细胞内的一切代谢活動（或超低温抑制酶的活性）有利于细胞特性的长期保存