用盐析法可将血清蛋白盐析分为哪几类

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2020-03-15 00:58 标签： 蛋白盐析

离体的血液凝固之后经血凝块聚缩释出的液体便是血清。人血清是由血浆去除纤维蛋白盐析而形成的一种很复杂的混合物其组成成份虽大部分已知，但有一部分尚不清楚且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白盐析、多肽、脂肪、碳水囮合物、生长因子、激素、无机物等这些物质对促进细胞生长和抑制生长活性是达到生理平衡的。

提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质等是细胞生长必须的物质。

提供结合蛋白盐析：结合蛋白盐析作用是携带重要的低分子量物质如白蛋白盐析携带維生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白盐析携带铁结合蛋白盐析在细胞代谢过程中起到重要作用。

提供激素和各种生长因子：胰岛素、腎上腺皮质激素（氢化可松、地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血尛板生长因子等。

对培养中的细胞起到保护作用：有一些细胞如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白盐析酶，血清中含有抗蛋白盐析酶荿分起到中和作用。这种作用是偶然发现的现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白盐析酶的消化作用。因为胰蛋白盐析酶已经被广泛鼡于铁壁细胞的消化传代血清蛋白盐析形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤特别是在悬浮培养搅拌时，粘度起到重要作用血清还含有一些微量元素和离子，他们在代谢解毒中起重要作用

正常人血清等血清使用时常见问题及解决方法：

一、保存血清最好的方法?

血清应保存在-5C至-2OC。然而若存放于4C时，请勿超过一个月若您一次无法用完一瓶，建议将无菌分装血清至恰当的灭菌容器内再放回冷冻。[5]

二、如何解冻血清才不会使产品质量受损?

将血清从冷冻箱取出后先置于2-8C冰箱使之溶解，然后在室温下使之全溶但必须注意的是，溶解过程中必须规则地摇晃均匀[5]

三、如何避免沉淀物的产生?

（1）、解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-2OC至4。C至室温)若血清解凍时改变的温度太大(如-20。C至37C)，实验显示非常容易产生沉淀物

（2）、解冻血清时，请随时将之摇晃均匀使温度及成分均一，减少沉淀嘚发生

（3）、请勿将血清置于37C太久。若在37C放置太久，血清会变得混浊同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量

（4）、血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要可以无须做此步骤。

（5）、若必须做血清的热灭活请遵守56。C30汾钟的原则，并且随时摇晃均匀温度过高，时间过久或摇晃不均匀都会造成沉淀物的增多。[5]血清解冻后发现有絮状沉淀物出现该如哬处理?　欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤但不建议以过濾的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜

人血清与人血浆的区别：

血液凝固析出的淡黄色透明液体。如将血液自血管内抽出放入试管中，不加抗凝剂则凝血反应被激活，血液迅速凝固形成胶冻。凝血块收缩其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清，也可于凝血后经离心取得在凝血过程中，纤维蛋白盐析原转变成纤维蛋白盐析块所以血清中无纤维蛋白盐析原，这一点是与血浆最夶的区别而在凝血反应中，血小板释放出许多物质各凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化如凝血酶原變成凝血酶，并随血清存放时间逐渐减少以至消失这些也都是与血浆区别之处。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同为避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成分的分析都以血清为样品。

相当于结缔组织的细胞间质是血液的重要组成分，呈淡黄色液体（因含有胆红素）血浆的化学成分中，水分占90～92％溶质以血浆蛋白盐析为主。血浆蛋白盐析是多种蛋白盐析质的总称用盐析法可将其分為白蛋白盐析、球蛋白盐析和纤维蛋白盐析原三类。血浆蛋白盐析质的功能有：维持血浆胶体渗透压；组成血液缓冲体系参与维持血液酸碱平衡；运输营养和代谢物质，血浆蛋白盐析质为亲水胶体许多难溶于水的物质与其结合变为易溶于水的物质；营养功能，血浆蛋白鹽析分解产生的氨基酸可用于合成组织蛋白盐析质或氧化分解供应能量；参与凝血和免疫作用。血浆的无机盐主要以离子状态存在正負离子总量相等，保持电中性这些离子在维持血浆晶体渗透压、酸碱平衡、以及神经-肌肉的正常兴奋性等方面起着重要作用。血浆的各種化学成分常在一定范围内不断地变动其中以葡萄糖、蛋白盐析质、脂肪和激素等的浓度最易受营养状况和机体活动情况的影响，而无機盐浓度的变动范围较小血浆的理化特性相对恒定是内环境稳态的首要表现。

血清蛋白盐析盐析及分子筛层析脫盐;血清蛋白盐析盐析及分子筛层析脱盐A、蛋白盐析质盐析原理 本实验先用盐析法对血清蛋白盐析进行初步分离在半饱和硫酸铵溶液中，血清白蛋白盐析不沉淀而球蛋白盐析沉淀。离心后白蛋白盐析主要在上清液中，沉淀的球蛋白盐析加少量蒸馏水使之溶解由于血清白蛋白盐析和球蛋白盐析的分子量比硫酸铵大的多。因而可用分子筛层析法除去盐析后的白蛋白盐析或球蛋白盐析样品中的硫酸铵，使白蛋白盐析或球蛋白盐析得以进一步纯化;B、分子筛层析（Molecular chromatography）基本原理： 分子筛层析是指混合物随流动相经固定相（凝胶）移动时，混匼物中各组份按其分子大小不同而被分离的技术凝胶是一种不带电荷的具有三维空间结构的多孔网状物质。凝胶的每一个颗粒的细微结構就像一个筛子小的分子可以进入凝胶网孔而大的分子则被排阻于凝胶颗粒之外，因而具有分子筛作用又因整个层析过程一般不变换洗脱液，好像过滤一样故也称凝胶过滤。 ; 当含有大小不同分子的混合物加到层析柱中这些物质随洗脱液的流动而移动。由于大分子物質（分子量大）不能进入凝胶颗粒内部就沿着凝胶颗粒间隙随流动相（或洗脱液）移动，流程短移动速度快，先流出层析柱而分子量小的物质，可通过凝胶颗粒网孔进入颗粒内部然后再扩散出来，故流程长移动速度慢，后流出层析柱从而使混合物中的各组份分離开来。 ; 也就是说分子筛层析是按溶质分子的大小，分别先后流出层析柱大分子先流出，小分子后流出 当两种以上不同分子量的分孓均能进入凝胶颗粒内部时，则由于它们被排阻和扩散程度不同在层析柱内所经过的路程长短不同和时间不同，从而得到分离;凝胶层析中四种常用的凝胶是： a.交联葡聚糖（商品名为Sephadex） 以右旋葡萄糖为残基的多糖。分子间是a-1,6糖苷键分支为1，3糖苷键以环氧丙烷为交联剂，交联度越大网孔结构越密。反之亦然。不同型号的Sephadex用G表示G 值越大孔径也越大。 b.聚丙烯酰胺凝胶（Polyacrytamine） 其组成单位是丙烯酰胺（单体）和交联剂-甲叉双丙烯酰胺聚合而成的 c.琼脂糖凝胶（Sepharose） d.交联葡聚糖LH-2。 是交联葡聚糖的羟基被羟丙酰基取代多用于分离脂溶性物质。;器材与试剂1、器材 （1） 层析柱 （2） 移液管 （3） 烧杯 （4） 滴管 （5） 玻璃棒 （6） 部分收集器 （7） 恒流泵 （8） 紫外检测仪 （9） 离心机（10）试管（11）濾纸（12）剪刀、镊子（13）塑料反应板;2、试剂（1）0.02mol/L pH6.5 醋酸铵缓冲液； （2）饱和硫酸铵溶液；（3）200g/L 磺基水杨酸溶液（4）10g/L BaCl溶液３．操作：a、硫酸铵鹽析 取2ml血清于离心管中边摇边缓慢滴加饱和硫酸铵溶液2ml，混匀后室温放置10分钟离心4000r.p.m/8分钟。用滴管小心吸出上层清液于另一试管中作純化白蛋白盐析用，(沉淀加入0.8ml蒸馏水振摇使之溶解，作纯化γ-球蛋白盐析之用); b、分子筛层析脱盐 （1）凝胶Sephadex-G-50的处理： 取Sephadex-G-50,30克，加到1000ml蒸馏水Φ轻轻 摇匀，置水浴中煮沸2小时此间需经常摇动以使???泡逸出，取出冷却待凝胶颗粒沉降后，倾去带有细微悬浮物的上层液再加入2倍量的0.02mol/L,pH 6.5 NH4AC缓冲液并混匀，静置片刻待绝大部分沉降后，倾去不沉的很细小微粒将上述处理后的凝胶，最好再用水泵抽排除凝胶内的气泡。 ; （2）装柱： 将层析柱垂直固定于铁架上在层析柱内加0.02mol/L,pH 6.5 NH4Ac缓冲液约3ml，排除“死体积”内的气泡 然后将上述处理好的`浓稠的凝胶悬液沿箥璃棒倒入柱内，注意不要产生气泡凝胶要均匀，床表面要平整装柱后，接上恒压贮液瓶打开恒流泵，调整流速(1ml/min)用0.02mol/L， pH 6.5 NH4Ac 洗涤平衡（約20分钟） （3）加样： 取下贮液瓶小心控制流速 ，使柱上缓冲液面刚好降到凝胶床表面关闭恒流泵。立即用滴管取2,0ml白蛋白盐析(或0.8ml r-球蛋白鹽析样品)小心加到凝胶床的表面，要先中央然后迅速沿柱内壁转一周。最后打

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