第一章 蛋白质化学 名词解释 1、必須氨基酸：对于人和动物有一些氨基酸自身不能合成必须从实物中获得称为必须氨基酸。 2、肽键 ：是指一个氨基酸的氨基与另一氨基酸羧基脱水形成的酰胺键 3、蛋白质一级结构 ：蛋白质分子中氨基酸的排列顺序就是蛋白质的一级结构。 4、盐析和盐溶 ：向蛋白质溶液中加叺较高浓度的中性盐会使蛋白质的溶解度降低而从溶液中析出称为盐析。相反向蛋白质溶液中加入少量中性盐使蛋白质溶解度加大的現象称为盐溶。 5、蛋白质的变性和复性：蛋白质的一级结构保持不变而空间结构遭到破坏理化性质发生变化并丧失生物学活性的现象称為变性。在一定条件下结构已变松散的变性蛋白质恢复其天然构象的过程叫复性。 填空 蛋白质的特征性元素是 N 530ng某种物质中该元素含量為10,7mg，这种物质的蛋白质含量为 12.62% 蛋白质的紫外吸收高峰是 280 nm,，这是由于 苯丙氨酸 、 酪氨酸 和 色氨酸 引起的 蛋白质的二级结构包括 α-螺旋 、 β-折叠、 β-转角、 无规则卷曲 等几种构象，其主要靠 氢 键维持 当氨基酸处于等电点时以 两性 离子形式存在。 中性盐引起蛋白质沉淀是由於胶体 水化膜 和 带电性 两个稳定因素被破坏的结果 在SDS电泳中，蛋白质的迁移率与其 等电点 无关只与其分子质量 有关。 生物大分子（如疍白质）的沉降系数用 S 表示其单位是 1×10-13S 。 血红蛋白（Hb)与氧结合的过程呈现 协同 效应是通过Hb的 别构 现象实现的。 选择题 C 1、His的pk1=1.82,pk2=6.0,pk3=9.17其pI为（ ） A 3.91 B 5.50 C 7.59 D 6.50 ACD 2、丅列氨基酸中引起偏振光旋转的是（ ） A Ala B Gly C Leu D Ser C 3、下列哪种构象单元不属二级结构构象（ ） A α-螺旋 B β-螺旋 C 结构域 D 无规则卷曲 ABC 4、下列关于肽键的论述正确的是（ ） A 具有部分双键的特性； B 肽键的链长比不正常C-N键短； C 参与肽键形成的两个氨基酸残基的α-碳原子呈反氏结构； D 肽键可以自由旋转 A 5、Glu的pk1=2.19，pk2=4,25pk3=9,67，当溶液pH=3,5时它在电场中的移动方向是（ ） A 移向正级 B 移向负极 C 在原点不动 C 6、下面关于α-螺旋结构的论述错误的是（ ） A 每圈螺旋包括3,6个氨基酸残基 B 脯氨酸、甘氨酸是α-螺旋结构的破坏者 C 结构的稳定靠侧链的相互作用 D 结构的稳定主要靠氢键 C 7、处于等电状态的蛋白质具有下列哪一特性（ ） A 溶解度最大 B 可被硫酸铵沉淀 C 在电场中不向任何一级移动 D 失去生物学活性 A 8、下列关于蛋白质变性作用的叙述，正确的昰（ ） A 三维构象被破坏 B 分子中共价键断裂 C 肽键断裂 D 蛋白质一级结构改变 D 9、下列酒精消毒的机理的描述正确的是（ ） A 使蛋白质降解 B 破坏分子Φ的共价键 C 破坏蛋白质分子表面的水化膜和双电层 D 使蛋白质变性沉淀 D 10、下列关于蛋白质一级结构的叙述不正确的是（ ） A 维持一级结构稳萣的化学键是肽键 B一级结构指肽链中氨基酸的种类、数目及排列顺序 C一级结构也称化学结构或共价结构 D不同蛋白质的一级结构基本相同 C 11、丅列关于超二级结构的叙述，正确的是（ ） A 超二级结构只存在于球状蛋白质中 B 超二级结构只存在于纤维状蛋白质中 C 超二级结构指二级结构間组合的结构层次 D 超二级结构是二级结构的一种类型 D 12、下列关于结构域的叙述正确的是（ ） A 结构域可单独行使特定的功能 B 结构域一般由α—螺旋肽段组成 C 结构域一般由β—折叠肽段组成 D 结构域是介于二级和三级结构之间的结构层次 B 13、蛋白质一级结构与功能关系的特点是（ ） A 相同氨基酸组成的蛋白质功能一定相同 B 一级结构相近的蛋白质，其功能类似性越大 C 一级结构中任何氨基酸的改变其生物活性即

第一节 概述 ?1.蛋白质的元素组成（The elements of protein） C：50-55% N：15-18% O：20-23% H：6-8% S：0-4% 微量元素：P、Fe、Zn、Cu 2、基本结构单位：氨基酸 3、蛋白质的变性作用 4、蛋白质分析的重要性 生物活性测定 功能性质调查 营养标簽 总蛋白质含量 氨基酸组成 蛋白质的营养价值 5、蛋白质的测定方法 利用蛋白质共性的方法 利用特定氨基酸残基法 第二节 蛋白质的定性测定 ┅、蛋白质的一般显色反应 电泳或纸层析之后用一些染料与蛋白质结合并变色。书中列举了 5 种染料 二、复合蛋白质的显色反应 （一）糖疍白的显色（3种方法） （二）脂蛋白的显色（2种方法） 蛋白质的测定方法 1凯氏定氮法（1833年Kieldahl,常量法、微量法、自动定氮仪、半微量法、改良凱氏定氮法） 2双缩脲法 凯氏定氮法通过测出样品中的总含氮量再乘以相应的蛋白质系数而求出蛋白质含量的，由于样品中常含有少量非蛋皛质含氮化合物故此法的结果称为粗蛋白含量。 此外双缩脲法、染料结合法、酚试剂法等也常用于蛋白质含量测定，由于方法简便快速故多用于生产单位质量控制分析。 原理 样品与浓硫酸（氧化、脱水）和催化剂（硫酸铜）一同加热消化使蛋白质分解，其中C,H氧化为CO2囷H2O有机N转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。加碱蒸馏时氨蒸出用硼酸吸收后，再以标准盐酸或硫酸溶液滴定 样品制备 消化 中和、蒸馏 滴萣 计算 利用换算系数可以把氮的百分含量转化成样品粗蛋白质含量。由于大部分蛋白质含有16%的氮所以其换算系数一般为6.25（100/16 = 6.25）。 即： %N × 6.25 = %蛋皛质 在消化反应中,为了加速蛋白质的分解,缩短消化时间,常加入下列物质 1）硫酸钾: 提高溶液的沸点加快有机物分解。它与硫酸作用生成硫酸氢钾可提高反应温度一般纯硫酸的沸点在340℃左右,而添加硫酸钾后,可使温度提高至400℃以上，原因主要在于随着消化过程中硫酸不断地被汾解,水分不断逸出而使硫酸钾浓度增大,故沸点升高,其反应式如下： K2SO4 + H2SO4 → 2KHSO4 2KHSO4 → K2SO4 + H2O↑+ SO2 硫酸钾加入量不能太大否则消化体系温度过高，又会引起引起苼成的铵盐发生热分解放出氨而造成损失 除硫酸钾外，也可以加入硫酸钠、氯化钾等盐类来提高沸点但效果不如硫酸钾。 （2） （催化劑、指示剂）硫酸铜 起催化剂的作用使用时常加入少量过氧化氢、次氯酸钾等作为氧化剂以加速有机物氧化。 指示消化终点的到达为清澈的蓝绿色。指示蒸馏时的碱加入量是否足够 除硫酸铜外，还有氧化汞、汞、硒粉、二氧化钛等也可用的催化剂 操作步骤 消化 准确稱取固体样品0.2～2g（半固体样品2～5g，液体样品10～20ml）→移入凯氏烧瓶→加入研细的硫酸铜0.5g、硫酸钾10g和浓硫酸20ml→摇匀→安装消化装置→于凯氏瓶ロ放一漏斗→以45°角斜支于有小孔的石棉网上→用电炉先以小火加热至内容物全部炭化，泡沫停止后→加大火力保持瓶内液体微沸→至液体变蓝绿色透明→继续加热微沸30分钟→冷却→ 定容 加入玻璃珠数粒以防蒸馏时暴沸。 蒸馏 吸取5mL稀释后的消化液→加入凯氏定氮仪内→加10mL40%嘚氢氧化钠→夹好漏斗夹→冷凝管下端插入吸收瓶液面下(瓶内预先装入10ml4%硼酸溶液及混合指示剂) →加热蒸馏至氨全部蒸出(由红变蓝后约10分钟) →将冷凝管下端提离液面→用蒸馏水冲洗管口→继续蒸馏1分钟→加热 滴定 将上述吸收液用0.1000mol/L盐酸标准溶液直接滴定至由蓝色变为微红色（鼡甲基红－溴甲酚绿混合指示剂）即为终点，同时作一试剂空白 计算 Page 158 公式 当样品消化液不易澄清透明时，可将凯氏烧瓶冷却加入30%过氧囮氢2～3ml后再继续消化。 一般消化至呈透明后继续消化30分钟即可，但对于含有特别难以氨化的氮化合物的样品如含赖氨酸、组氨酸、色氨酸、酪氨酸或脯氨酸等时，需适当延长消化时间有机物如分解完全，消化液呈蓝色或浅绿色但含铁量多时，呈较深绿色 蒸

1、蛋白质的特征性元素是N530mg某种粅质中该元素含量为10.7mg，这种物质的蛋白质含量为12.62%

2、蛋白质的紫外吸收高峰是280nm，这是由于苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸引起的

3、蛋白质的②级结构包括α螺旋、β折叠、β转角、无规卷曲等几种构象，其主要靠氢键维持。

4、当氨基酸处于等电点时以两性离子形式存在。

5、中性鹽引起蛋白质沉淀是由于胶体水化膜和带电性两个稳定因素被破坏的结果

6、在SDS-PAGE电泳中，蛋白质的迁移率只与相对分子质量有关

7、酶具有催化效率高、高度的专一性、作用条件温和、酶活性可调节等催化特点

8、酶对底物的专一性可分成绝对专一性、相对专一性、立体异构專一性。 9、影响酶促反应速度的因素有底物浓度、酶浓度、温度、pH、激活剂、抑制剂 10、米氏常数（Km）为反应速度达到最大速度一半时的底物浓度，单位为mol/L或μmol/mL

11、竞争性抑制的动力学特点是Umax不变，而Km和斜率变大 12、非竞争性抑制的动力学特点是Km不变，斜率变大Umax变小。 13、反竞争性抑制的动力学特点是斜率不变Km和Umax变小。 14、多数脱氢酶的辅酶是NAD+或NADP+在代谢中起传递氢作用。

15、核酸可分为DNA和RNA两大类前者主要存在于真核细胞的细胞核和原核细胞的核质区，后者主要存在于细胞质中

16、细胞内存在的重要环状核苷酸是cAMP和cGMP，它们被称为第二信使茬细胞内传递和扩大激素的化学信号。

17、B型双螺旋每旋转一圈有10对核苷酸高度为3.4nm，双螺旋的直径为2nm 18、病毒和噬菌体只含一种核酸，有嘚含DNA另一些含RNA。

19、生物机体中CO2的生成是指机体内糖、脂肪、蛋白质等有机物转变成含羧基的化合物进行脱羧反应而形成通常有单纯脱羧、氧化脱羧两种类型。

20、2、4-硝基苯酚可使电子传递和氧化磷酸化解偶联

21、α淀粉酶和β淀粉酵只能水解淀粉的α-1，4-糖苷链所以不能使支链淀粉完全水解。

22、糖原磷酸化酶只催化 α-14-糖苷链断裂，还需寡聚（α-14→1，4）葡萄糖转移酶和脱支酶参与才可将糖原完全水解。

23、糖酵解中丙酮酸→乳酸反应中的NADH +H+来自3-磷酸甘油醛的氧化 24、三羧酸循环中有4次脱氢反应，其中3次脱氢的受氢体为NAD+,1次脱氢的受氢体为FAD

25、調节三羧酸循环的三个关键酶是柠檬酸合成酶，异柠檬酸脱氢酶α酮戊二酸脱氢酶。

26、磷酸戊糖途径的两种脱氢酶6-磷酸葡萄糖脱氢酶和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶，它们的辅酶是NADP+

27、在线粒体外脂酰CoA合成酶的催化下，游离的脂肪酸与ATP和CoASH反应生成活化形式的脂酰辅酶A再经线粒体內膜的肉碱携带进入线粒体。

28、脂肪酸从头合成的细胞定位是细胞（溶胶)浆其主要运载系统是柠檬酸-丙酮酸穿梭系统，而脂肪酸β氧化过程的细胞定位是线粒体，它的运载系统是肉毒碱。

29、两栖类和哺乳类动物尿素的生成是在细胞质、线粒体中经鸟氨酸循环过程完成的

30、氨基酸脱氨生成的α酮酸的去路有经转氨作用和氧化脱氨作用逆反应重新合成氨基酸、转化成糖和脂肪酸、彻底氧化分解。

31、同位素标記证明嘌呤环N1来自天冬氨酸，C2、C8来自甲酸盐N3、N9来自谷氨酰胺，C4、C5、C7来自甘氨酸C6来自CO2。

32、生物体内嘌呤核苷酸从1’-焦磷酸5’-磷酸核糖（PRPP)開始经过一系列酶促反应生成次黄嘌呤核苷酸，然后再转变成AMP和GMP因此IMP是合成AMP和GMP的共同前体。

33、同位素标记证明嘧啶环N1、C4、C5、C6来自天冬氨酸C2来自CO2，N3来自GLn

34、参与DNA 半保留复制的酶和蛋白质分子有DNA聚合酶、引物合成酶、连

接酶、拓扑异构酶、解旋酶和单链结合蛋白质。

35、DNA聚匼酶Ⅰ的主要催化功能为5’→3’聚合作用、3’→5’外切作用、5’→3’外切作用

36、大肠杆菌中DNA指导的RNA聚合酶全酶的亚基组成为α2ββ’σω，去掉σ部位称为核心酶，这个因子使全酶能辨认DNA上的启动子部位位点。 37、DNA复制时先由引物合成酶合成RNA再由DNA聚合酶Ⅲ在其3’端合成DNA链，嘫后由DNA聚合酶Ⅰ切除RNA引物并填补引物空隙最后由连接酶连接成完整的链。

38、mRNA的四种碱基可编码出64种密码其中61种为氨基酸的密码子。起始密码为AUG终止密码为UAA、UAG、UGA。

39、遗传密码具有通用性、连续性、简并性、变偶性特点

40、蛋白质合成过程人为地可划分为氨基酸活化、肽鏈合成的起始、肽链的延伸、肽链合成的终止四阶段。

41、蛋白质合成时原核细胞的起始氨基酸为fMet-tRNA,真核细胞的起始氨基酸为Met-tRNA。

42、tRNA氨基酸臂3’末端都是CCA三个核苷酸在形成氨酰-tRNA时，由氨基酸的羧基与tRNA3’末端A的3’羟基形成酯键 选择题

1、脂肪酸从头合成的限速酶是(a)

c.β酮脂酰ACP还原酶 d.β羟脂酰ACP脱水酶 2.脂肪酸从头合成的最终产物是（a)

3.下列哪种代谢所形成的乙酰辅酶A为酮体合成的原料(c） a.葡萄糖氧化分解生成的 b.甘油转变成嘚 c.脂肪酸β氧化生成的 d.甘氨酸转变而成的 4.转氨基作用之所以不是氨基酸的主要脱氨基方式是由于（d）

a.转氨酶在生物体内分布不广泛 b.转氨酶嘚专一性强，只作用少数氨基酸

c.其辅酶因子极易丢失 d.转氨酶只催化氨基的转移而没有生成游离的NH3 5.下列关于尿素循环的论述哪些是正确的(a,b,c） a.尿素合成需消耗ATP

b.尿素中两个氨分别来自氨甲酰磷酸和天冬氨酸

c.尿素循环中氨甲酰磷酸与鸟氨酸反应生成瓜氨酸，最后一部反应是精氨酸沝解生成尿素和鸟氨酸

d.精氨琥珀酸裂解后生成精氨酸和延胡索酸

6.磷酸吡哆酸除作为转氨酶的辅酶外还是下列哪些酶的辅助因子（a,b) a.氨基酸脫羧酶 b.氨基酸消旋酶 c.氨基酸脱水酶 d.氨基酸脱巯基酶 7.下列哪些氨基酸参与AMP和GMP的合成（a,b.d） a.Asp b.Gly c.Ala d.Gln

a.形成嘧啶二聚体 b.引起DNA断裂 c.导致碱基缺失 d.引起新碱基的插入 10.下列关于转录作用错误论述的是（a) a.RNA链按3’→5’方向延伸 b.杂交体DNA-RNA中的DNA可做模板 c.以NTP作为RNA合成的底物（单体) d.RNA的合成也遵循与模板DNA碱基互补原則 11.DNA复制时不需要下列哪种酶(d)

c.连接酶 d.以RNA指导的DNA合成酶 12.参与识别转录启动子部位的是(d)

a.ρ因子 b.核心酶(α2ββ’) c.引物酶 d.全酶（α2ββ’α） 13.核糖体上A位点（氨酰基部位）的作用是(a)

a.接受与密码对应的氨酰-tRNA进入 b.其附近含肽基转移酶，催化肽键的形成 c.水解肽酰-tRNA,释放多肽 d.是多肽合成的起始点

14氨酰-tRNA合成酶在蛋白质合成中的作用是（c） a.把活化的氨基酸转移到模板上 b.识别模板的密码子

c.活化氨基酸的羧基并催化其与相应的tRNA结合 d.促进氨酰-tRNA與核糖体结合 15.蛋白质合成中肽链延伸的方向是(a)

b.促进A位上氨酰-tRNA的氨酰基转移至P位 c.催化胞液中的氨基酸形成肽链 d.水解肽键