37临床微生物学问答题大全-第3页
上亿文档资料，等你来发现
37临床微生物学问答题大全-3
57.为什么CDC提出应将大肠埃希菌O157：H；答：EHEC的血清型＞50种,最具代表性的是O1；且O157是4岁以下儿童急性肾功能衰竭的主要病原；58.试述沙门菌变异性；答：沙门菌属在一定条件下发生变异,主要表现为:；(1)S-R变异自临床标本初次分离的菌株一般都是；(2)H-0变异是指有鞭毛的沙门菌失去鞭毛的变异；(3)相位变异具有双相H抗原的沙门菌变
57.为什么CDC提出应将大肠埃希菌O157：H7列为常规检测项目? 答：EHEC的血清型＞50种,最具代表性的是O157:H7,在北美许多地区, O157:H7占肠道分离病原的第二位或第三位(多于志贺菌和耶尔森菌),是从血便中分离到的最常见的病原菌,分离率占血便的40%,6、7、8三个月O157:H7感染的发生率最高。且O157是4岁以下儿童急性肾功能衰竭的主要病原菌,所以CDC提出应将大肠埃希菌O157:H7列为常规检测项目。 58.试述沙门菌变异性。 答：沙门菌属在一定条件下发生变异,主要表现为:(1)S-R变异 自临床标本初次分离的菌株一般都是光滑型,但经人工培养、传代后可逐渐变成粗糙型菌落,此时菌体表面的特异多糖抗原丧失,在生理盐水中可出现自凝。(2)H-0变异 是指有鞭毛的沙门菌失去鞭毛的变异。(3)相位变异 具有双相H抗原的沙门菌变成只有其中某一相H抗原的单相菌,称相位变异。(4)V-W变异 是指沙门菌失去Vi抗原的变异。 59.在沙门菌鉴定过程中,如何处理血清凝集反应中的问题? 答：与多价抗血清不凝集时,可在玻璃试管内用生理盐水将细菌制成浓菌液,煮沸15-30min,冷却后再次做凝集试验,因Vi抗原能阻断0凝集反应,而煮沸处理能破坏菌体表面的Vi抗原。 仅出现单相H抗原(第一相或第二相)时,需用位相分离的方法诱导出另一相抗原后再进行检查。 60.志贺菌的鉴定要点是什么?如何与类志贺邻单胞菌进行鉴别? 答：志贺菌的鉴定要点是:(1)无动力,赖氨酸阴性。(2)发酵糖产酸不产气(福氏志贺6型、鲍氏志贺菌13和14型、痢疾志贺菌3型除外)。(3)分解粘多糖,在醋酸盐和枸橼酸盐琼脂上产碱。志贺菌属与类志贺邻单胞菌可用动力和氧化酶试验加以鉴别,志贺菌属均为阴性,而类志贺邻单胞菌为阳性。 61.肺炎克雷伯菌初次分离培养基上菌落有何特点? 答：在初次培养基上可形成较大、凸起、灰白色粘液型的菌落。菌落大而厚实、光亮,相邻菌落容易发生融合,用接种针沾取时可挑出长丝状细丝。在MAC培养基上发酵乳糖产酸,形成较大的粘液型、红色的菌落,红色可扩散至菌落周围的培养基中。 62.试述变形杆菌的鉴定依据是什么? 答：菌落在营养琼脂和血琼脂平板上迁徙生长,在肠道选择培养基上乳糖不发酵,呈无色菌落,在SS琼脂上产硫化氢,菌落中心呈黑色。根据氧化酶阴性,脲酶阳性,苯丙氨酸脱氨酶阳性,KIA:斜面产碱,底层产酸产气,H↓&2&S+,可初步鉴定为变形杆菌属。 63.临床常见的需氧革兰阳性杆菌有哪些? 答：临床常见的需氧革兰阳性杆菌有棒状杆菌属中的白喉棒状杆菌、芽胞杆菌属中的炭疽杆菌和蜡样芽胞杆菌,李斯特菌属中产单核细胞李斯特菌、丹毒丝菌属中红斑丹毒丝菌和加德纳菌属中的阴道加德纳菌。 64.简述炭疽芽胞杆菌生物学性状。 答：(1)取自病人或病畜的新鲜标本直接涂片时,常单个存在或呈短链,经培养后则形成长链,呈竹节状排列。(2)芽胞多在有氧下形成,有毒菌株可有明显的荚膜。(3)本菌为需氧或兼性厌氧菌,生长条件不严格,最适温度为30℃-35℃,在普通琼脂培养基上形成灰色、粗糙型菌落,在低倍镜下观察菌落呈卷发状。(4)在血平板上不溶血,在肉汤培养基中由于形成长链而呈絮状沉淀生长。(5)在明胶培养基中经37℃18-24h可使表面液化成漏斗状,这是由于细菌沿穿刺线向四周扩散成倒松树状。有毒菌株在NaHCO↓&3&血琼脂平板上置5%C0↓&2&37℃环境中24-48h可产生荚膜,变成粘液型(M)菌落,无毒菌株为粗糙型(R)菌落。能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖,有些菌株能迟缓发酵甘油和水杨素,产酸不产气。能水解淀粉,不发酵鼠李糖、半乳糖等其他糖类,能还原硝酸盐为亚硝酸盐,不产生吲哚和硫化氢,不利用枸橼酸盐,不分解尿素,在牛乳中生长2-4d牛乳凝固,然后缓慢陈化,卵磷脂酶弱阳性,触酶阳性。 65.炭疽芽胞杆菌有哪些主要的鉴定试验? 答：炭疽芽胞杆菌是引起人畜共患急性传染病一炭疽病的病原菌。本菌发病急,死亡率高,因此实验室检验有重要意义,主要的鉴定试验如下:1噬菌体裂解试验;2串珠试验;3青霉素抑制试验;4串珠和青霉素抑制联合试验;5重碳酸盐毒力试验;6动物试验;7植物凝集素试验。66.如何提高流感嗜血杆菌培养阳性率? 答：(1)流感嗜血杆菌初次培养应在5%-10%C0↓&2&环境。(2)生长中需要X、V因子,故可在培养基中添加此因子。(3)应用选择性培养基,如巧克力琼脂,并加入一定量抗生素,1ml培养基中含万古霉素50μg、杆菌肽300μg、氯林可霉素1μg,嗜血杆菌分离率可达96.7%。 67.一患者食用海味发生食物中毒,取其呕吐物培养得到一种动力阳性菌,血清制功试验阴性,移种KIA、MIU培养基:葡萄糖(+)、乳糖（-）、H↓&2&S(-)、动力(+)、吲哚(+)、尿素酶(-),氧化酶(+),该菌很可能为何种菌?如何进一步鉴定。答：(1)引起食物中毒的革兰阴性杆菌,一般有某些沙门氏菌、变形杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌以及副溶血性弧菌等,提示结果分析可能为耐盐的副溶血性弧菌。(2)进一步的鉴定试验包括嗜盐试验、生化反应及血清学试验。 68.简述厌氧菌在厌氧条件下生存的机制。 答：厌氧菌庆氧机制:(1)缺乏细胞色素酶和细胞色素氧化酶。在有氧的情况下,培养基中的物质被氧化,转变成氧化型的物质较多,需要氧化还原电势较高的酶如细胞色素酶和细胞色素氧化酶,才能将其氧化。而厌氧菌不具备这些酶类,不能氧化电势高的物质,最后因能量供应不足而死亡。(2)缺乏触酶和过氧化氢酶。有氧时,细菌生长由需氧脱氢酶催化有氧氧化,产生过氧化氢。它能抑制乙酰辅酶A的分解,因而阻碍细菌的脂类代谢。厌氧菌缺乏此酶,不能分解H↓&2&0↓&2&,而致代谢终止死亡。(3)缺乏超氧化物歧化酶。某些细菌氧化代谢的最终产物是超氧化物自由基0↓&2&-，具有高氧化能力,对细菌的毒害作用比H↓&2&0↓&2&大得多,而厌氧菌无此歧化酶,不能解除其毒害。综上所述,厌氧菌由于缺乏与需氧菌类似的一些酶类,不能耐受0↓&2&，故而不能在有氧环境中生存。 69.写出五种临床上常见的厌氧菌的名称及所致疾病。 答：1破伤风梭菌:破伤风;2产气荚膜梭菌:气性坏疽;3肉毒梭菌:食物中毒;4脆弱类杆菌:肠道,生殖道,颅内等感染;5难辨梭菌:伪膜性肠炎等。 70.分离培养厌氧菌失误的原因有哪些? 答：如果临床怀疑有厌氧菌感染的标本,而分离培养为阴性,可能有下述失误。(1)培养前未作标本的直接涂片和染色镜检。(2)标本在空气中放置太久或接种的操作时间过长。(3)未用新鲜配制的培养基。(4)未用选择培养基,以抑制兼性厌氧菌生长。(5)培养基未加必要的补充物质,如氯化血红素、维生素K1等,它们对类杆菌特别是产黑素类杆菌的生长有促进作用,所以未加上述必要补充物质的培养基,厌氧菌不生长。(6)用硫乙醇酸盐作为唯一厌氧菌培养基,而有些厌氧菌在该培养基中不能生长,故初代培养不应用硫乙醇酸钠。(7)没有合适的厌氧缸或厌氧装置,或厌氧装置漏气,或其他原因导致厌氧环境不适宜(如厌氧缸内催化剂失活或氧化还原指示剂失效等)。(8)培养时间不足。(9)厌氧菌的鉴定材料有问题,如鉴定用的培养基、试剂和抗生素纸片失效,都可能导致鉴定错误。 71.试述产气荚膜梭菌的鉴定依据。 答：产气荚膜梭菌的鉴定依据是:(1)革兰阳性粗大杆菌、短粗方头,常伴其他杂菌,芽胞不易看到,可见荚膜。(2)菌落特征和糖发酵反应,特别是“汹涌发酵&&现象。(3)Nagler氏试验阳性。(4)动物试验(血性水肿、泡沫肝等)。(5)挥发性代谢产物的测定(主要为乙酸和丁酸,有时也形成丁醇)。 72.什么叫Koch现象? 答：结核的特异性免疫是通过结核分校杆菌感染后所产生的。实验证明,将有毒结核分枝杆菌纯培养物初次接种于健康豚鼠,不产生速发型过敏反应,而经10-14d,局部逐渐形成肿块,继而坏死、溃疡,细菌侵入附近的淋巴结,再通过淋巴-血流向全身播散。局部溃疡经久不愈,直至动物死亡。若在8-12周之前给动物接种减毒的或小量结核分校杆菌(即行人工感染),则局部反应提前出现,于2-3d内发生红肿硬结,后有溃疡形成但很快趋于痊愈,且附近淋巴结不受侵犯,亦无细菌周身播散。此为Koch在1891年观察到的后为Rich所描述,故称为Koch现象。73.非结核分枝杆菌Runyon分类有几群?每群各举2例。 答：非结核分校杆菌Runyon分类有四群:(1)堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌。(2)瘰疬痴分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌。(3)鸟-胞内复合分校杆菌、蟾分枝杆菌。(4)偶发分枝杆、龟分枝杆菌。 74.试述结核菌分枝杆菌培养特性。 答：本菌为专性需氧菌,在元氧条件下迅速死亡。为兼性细胞内寄生菌,在细胞内外均可发育繁殖,强毒菌株可长期生存于巨噬细胞内。生长条件37℃,pH6.4-7.0。具有强的疏水性,菌落不易乳化于水及生理盐水。本菌繁殖周期较多数细菌长,在最佳培养基上至少14-15h繁殖一代。群体生长于以鸡蛋为基础的固体培养基上,初次分离需4-8周,次代培养仍需2-4周。营养要求尤高,需要卵黄、血液、马铃薯淀粉等有机物质,碳、氮、磷、钾、镁、铁等无机盐类以及氨基酸、菸酸、核黄素等。75.试述麻风分枝杆菌形态与染色特性。 答：麻风分枝杆菌亦为抗酸杆菌,但较结核分枝杆菌短而粗,大小约1-8μm×0.3-0.5μm,抗酸染色着色均匀,呈束状或团状排列。麻风分枝杆菌为典型的胞内寄生菌,有该菌存在的细胞胞质呈泡沫状称为麻风细胞。用药后细菌可断裂为颗粒状、链杆状等,着色不均匀,叫不完整染色菌。革兰染色阳性,无动力,无荚膜,亦无芽胞。 76.BACTEC-460系统检测分枝杆菌的基本原理。 答：BACTEC-460自动快速检测仪的主要原理是测定分枝杆菌的代谢产物。在指定专用的7H12或12B培养瓶中加入放射性14C棕榈酸产物,当检测标本经处理接种于该培养基内,如果有分枝杆菌存在,分枝杆菌代谢时将产生中间产物和终末产物,如利用培养瓶中标记14C棕榈酸产物而产生带有放射性的14C0↓&2&,BACTEC仪将培养基中14C0↓&2&送入电 ]xFZ'l|&l)离室,并自动显示测定结果。以生长指数(growth index,GI)表示,连续观察,如果GI升高达某一程度,则报告有分枝杆菌生长,即为阳性。 77.简述病毒的特点。 答：病毒具有如下特点:不具有细胞结构;只具有一种类型的核酸(RNA或DNA);特殊的繁殖方式――复制;缺乏完整的酶系统和能量合成系统;不具有核糖体;绝对的细胞内寄生。78.简述细胞培养的基本条件。 答：细胞培养的基本条件为:1水,主要作为溶剂。2无机盐,如Na↑&+&、K↑&+&、Mg++、Ca++、Cl↑&-&、HCO↓&3&-。其作用是:作为细胞的正常组成成分;维持渗透压和酸碱平衡;促进细胞贴壁;作为细胞代谢过程中某些酶的激活剂。3碳水化合物,主要为葡萄糖等单糖,其作用是:为细胞提供能量;维持渗透压。4有机氮,主要为蛋白质及各种氨基酸,此类物质在血清、血浆、水解酪蛋白中含量很丰富,其作用是:作为细胞的重要组成部分;帮助细胞贴壁;促进细胞生长;解除某些物质对细胞的毒性作用。5维生素,主要作为某些酶的辅酶参与细胞的新陈代谢。6其他营养物质,如嘧啶、核糖及脱氧核糖、激素等。 79.在实验动物中,悉生动物与普通动物相比有何优点? 答：悉生动物有如下优点:悉生动物作为实验动物无传染病及寄生虫感染;试验结果明确;所需动物数少;利于长期的实验观察,实验中死亡率低,存活率高;能利用它对实验进行准确设计,故由其得出的实验结果具有较高的统计价值。 80.为什么病毒必须在活的敏感细胞内才能生长繁殖? 答：因为:1病毒本身没有合成蛋白质的场所一核糖体,故必须借助宿主细胞的核糖体合成蛋白质;2由于病毒缺乏完整而又必须的酶,故必须借助细胞的某些酶才能复制;3只有敏感细胞上才有病毒的受体,病毒与受体结合后才能进入细胞内生长繁殖。 81.什么是干扰缺损病毒? 答：干扰缺损病毒(DI颗粒)是指在病毒感染时产生的一类亚基因缺失突变体,它们因失去了其亲代病毒基因组中的复制必需片段,故不能单独进行复制,而必须在其同型的完全病毒的辅助下,由完全病毒提供DI颗粒已丧失的但又为复制所必需的基因功能才能复制。同时,由于DI颗粒与完全病毒竞争复制所必需的基因产物,从而可抑制完全病毒的复制。 82.简述病毒复制的基本过程。 答：病毒复制的基本过程为:1吸附,即病毒颗粒与细胞膜的受体发生相互作用后病毒颗粒特异性地吸附于宿主细胞表面;2穿入,病毒吸附于宿主细胞膜后以各种不同的方式进入细胞,此即穿入;3脱壳,病毒在宿主细胞内脱去核壳,病毒核酸随后进入细胞的一定部位;4病毒大分子的生物合成,病毒基因组进入宿主细胞后,一方面表达与合成病毒复制过程中所必需的结构蛋白和非结构蛋白,另一方面进行复制合成子代病毒核酸;5装配与释放,病毒核酸与壳体蛋白合包含各类专业文献、外语学习资料、应用写作文书、生活休闲娱乐、专业论文、37临床微生物学问答题大全等内容。　
　 临床微生物学与检验试题... 暂无评价 98页 1下载券 微生物学与检验试题 5... 儿童笑话大全爆笑 爆笑笑话精选90份文档 2014年执业医师考试指导... 　临床微生物学与检验习题集本习题集由三部分构成,第一部分为基础题,主要测试学生对每一章节内容 的掌握程度;第二部分为综合题,侧重考查学生综合分析问题的能力及对... 　临床微生物学及微生物检验试题三_生物学_自然科学_专业资料 暂无评价|0人阅读|0次下载|举报文档 临床微生物学及微生物检验试题三_生物学_自然科学_专业资料。... 　 医学检验考试题库-临床微生物学病例分析题_其它考试_资格考试/认证_教育专区。... 中医养生知识大全 女人养生之道 89份文档
应届生求职季宝典 英文个人简历模板... 　临床微生物学与检验习题集 本习题集由三部分构成,第一部分为基础题,主要测试学生对每一章节内容的掌握程度;第 二部分为综合题, 侧重考查学生综合分析问题的能力及... 　 临床微生物学与检验习题... 96页 免费 临床微生物学与检验试题 5页 1下载...微生物学检验复习题(供 2008 级医学检验本科) 微生物学检验复习题名词解释: ... 　 微生物问答题_医学_高等教育_教育专区。是期末考试...3.简述细菌的合成代谢产物及其临床意义。 细菌的合成...8. 简述肠热症的微生物学检查方法。 伤寒沙门菌的... 　选择抗菌药物、研究细菌 对结晶紫的敏感性、细菌的等电点、指导临床用药有重要...四、问答题 1. 请简要说明霍乱弧菌的微生物学检查法:霍乱属于烈性传染病。若... 　 病理学名词解释及问答题大全(带答案)_医学_高等教育_教育专区。病理学名词解释...学、组织胚胎学、生理学、生物化学、寄生 虫学、微生物学等为基础;③为临床...35郑州市肠出血性大肠杆菌O157H7感染监测
上亿文档资料，等你来发现
35郑州市肠出血性大肠杆菌O157H7感染监测
现代预防医学２００７年第３４卷第２１期Ｍｏｄｅｒ；文章编号：１００３―８５０７【２００７）２１一：；中图分类号：Ｒ３７８．２＋ｌ文献标识码：Ａ；【疾病预防控制】；郑州市肠出血性大肠杆菌０１５７：Ｈ７感染监测；殷毅峥，程春荣，杨建国，安戈，武恩平，段晶晶，水；摘要：；（目的］２００５单监剥都州市舾出ｍ性大肠杆菌０１；钟订新发传般病防治措施，提供基础疫情贷斟；毒
现代预防医学２００７年第３４卷第２１期ＭｏｄｅｒｎＰｒｅｖｅｎｔｉｖｅＭｅｄｉｅｉｎｅ，２００７，ｖｄ．３４，ＮＯ．２１４１７５文章编号：１００３―８５０７【２００７）２１一：Ｈ７５―０３中图分类号：Ｒ３７８．２＋ｌ文献标识码：Ａ【疾病预防控制】郑州市肠出血性大肠杆菌０１５７：Ｈ７感染监测殷毅峥，程春荣，杨建国，安戈，武恩平，段晶晶，水艳…摘要：（目的］２００５单监剥都州市舾出ｍ性大肠杆菌０１５７：Ｈ７膊柴报ｌ撼腰痛原分布特点．为各级卫生行政部ｊ’ｊ钟订新发传般病防治措施，提供基础疫情贷斟。Ｉ方法］＿ｊ｜荛期４糯奉用篼疫磁球集菌方法（／ＭＳ）做病原学分离培养、毒力基疆槛测埔多重ＰＣＲ方法、莺敏斌验饿鞭（Ｋ－Ｂ）紫挺方法。Ｅ姑幕］馥ｊ孽撬冀话奉１８５髂，大舫抒萤０１５７：Ｈ７挺受精挂４瞬。丹巧境撼枣５８８赞，控癌轰黪’轩嚣０１５７ｆ鞋嚣淹蛙２０囊％臻多ＰＣＲ方法擞簿力萋潼控莉，艟６掰家畜家禽阳性拆率中拴出０１Ｓ勘Ｈ７毒沩整日（Ｓｔｘ２，ｅａｅＡ、ｆ蜘Ａ）为阳性二药敏试验２４株舫础血性赤斯杆菌０１５７：１１７对８种抗菌药糟１敏感率为９鳓以业，囊扛瓤毪霉紊。ｉ００％耐碍，演祭７种对抗蔚料物敏感程度咎有差异。、一、簧鐾遗：｜：藏警蓝整喾嚣稽爱０醇聂ｊ１１７；ｉ豫穗；、冀蔗礤爨燕穰法（ｔＭＳ）；多譬ＰＣＲ洼ｉ羹教试验＿、［结论］２，５州市右赦枉曲＾“舾嚣菌０１５７：Ｈ７枣染的癌氏袋赫齄癀点≯奶串张液冰山羊筵失腑杼毽０１５７：Ｈ７舒转宿主。ｓＵＲＶＥＩＬＬＡＮＣＥＦＯＲＥＮＴＥＲＯＨＥＭＯＲＲＨＡＧＩＣＥ．ＣＯＬＩ０１５７：Ｈ７ＩＮＺＨＥＮＧＺＨＯＵＣＩＴＹ摹１ｈＹｉ－ｚｈｅｌ晦ｏＣＨＥＮＧＣｈｕｎ－ｒｏｎｇ，气｜Ａ烈ＧＪｉａｎ一垫懈。ｅｔ越．０ｚｋｎ昏幽姚ＭｕｎｉｅｉｐｄＣｏｎｔｒｏｌａｉ搿Ｐｒｅｖｅ｝ｒｔｌｏｎ，，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５００００．￡＆ｉ≈神ＣｅｎｔｅｒｆｏｒＤｉｓｅａｓｅ奠Ａｂｓｔｒａ螽［Ｏｂｉｅｃｔｉｖｅ］Ｔｏｄｌｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ．ｊｉｎｏｒｄｅｒｔｏｍｏｎｉｔｏｒｔｈｅｉ穗ｃｔｉｖｅⅫｅｏｆｅｎｔｅｒｏｈｅａｍｒｒｈａｇｉｃＥｓｅｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｔ０１５７Ｈ７ａｎｄｅｔｉｏｌｏｇｉｃＬＯｐｒｏｖｉｄｅｂａｓｉｃｄａｔａａｂｏｕｔｔｈｅｅｐｉｄｅｍｉｃｓｉｔｕａｔｉｏｎｆｏｒｍｅｄｉｃａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｖｅｏ。ｅｐａｒｔｍｅｎｔｓｆｏｒｎｅｗｗｏｒｋＯｔｔｌｊｊｐｒｅｖｅｌｌｔｌｏｎ删ｅｍｄｅｔｅｃｔｌｏｎｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎｄｉｓｅａｓｅ８．［Ｍｅｔｈｏｄｓ］ｓｐｅｅｆｆｒ／ｅｒｌｓＫ－Ｂ．［Ｒｅｓｕｌｔｓ３ｗｅｒｅ１８０ｌ。ａ［ｅｌｌ‘ｂｙＩＭＳ．ｖｉｒｔｔｌｅｎｃｅｇｅｎｒｅ０１５７：Ｈ７ｗｅｉｅａｎｄｄｒｕｇｓｅｎｓｉｔｉｙｉｔｙｔｅｓｔＷｅｒｅｃｏｎｄｕｃｔｅｄｂｙＰＥＲａｎｄ４ｐｔｍｌｔｉｖｅｅｄｓｅｓｏｆＣｏｌｉｂａｃｉｌｌｕｓ菇娥ｅｄ、ａｍｏｎｇｉ１８５ｄｉａｒｒｈｅａｐａｆｉｅｎＮ．Ｔｈｅｖｌｎ矗ｅｎｅｅｇｅｎｅｓ（．ｓｔｘ２、ｅａｅＡ、ＨｉｙＡ）ｗｅ衅ｐｕｓｉｆｉｖｅａｍＯＩｌｇ５８８ｅｘ酶鞭ａ｝ｅｎｖｔｒｏｎｔｚｍｎｌｄｒａｇｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ｝ｅ驰ｔｏ８ａｎｔ／ｂａｃｔｅｒｉａｌｓｗａｓ㈣ｕｐｌｅ＆Ｔｈｅ：Ｓｅｌｌｓｉｔｉｖｅ殂靶ｏｆＩ｜ａｂ州ｅ９５％．Ｔｈｅｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ１＂ｔ１１１，ＷＩｔ，；１００％ｔｏ南ｂ１０ｃｉｎａａｎｄｔｈｅ￥ｅｎ８ｉｔｉｖｅｌｅｖｅｌ８ｏｆｔｈｃｍ８ｔ７ｋｉｎｄｓｏｆａｎｄａｎｔｍａｌ０１５７：Ｅ７．ｃｐｉｄｅｍｉｃｆｏｃｕｓｗｈｉｃｈ１’５ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｓｗｅ陀ｄｉｔｔｉ！ｍｎｔ［Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］Ｔｈｅｒｅｉｓｓｐｏｒａｄｋ。｜ｐｎＬ州】ｋＨ７．Ｔｈｅｃｏｗｉｎｆｅｃｔｅｄｂｙｃｏｌｉｂａｃｉｌｌｕｓ０１５７ａｎｄＢｏｈｒｇｏａｔａｍａｎｉｍａｌｈｏｓｔｏｆｃｏｌｉｂａｃｉｌｌｕｓＫｅｙｗｏｒｄｓ：ＥｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ０１５７ＰＣＲ；ＤｒｕｇｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｅｓｔｉＨ７；｜Ｍｏｎｉｔｏｒｉｍｍｕｎｏｍａｇｎｅｔｉｃｂｅａｄｓ《ｉＭＳ）；Ｍｕｌｔｉ－肠出血性大肠杆菌０１５７：Ｈ７感染是一种新发现的传染病．可引起出血性结肠炎，严重者井发溶血性尿毒综合征和血栓性血小板减少性紫瘢。这种并发症病死率高，预后差，对人类健康构成重大威胁。近年来发达国家和发展中国家不断发生．由肠出血性大肠杆菌０１５７：Ｈ７感染引起暴发流行已成为世界性公共卫生问题【１１。２００５年郑州市承担了４个痛种的重点肠道传染病河南省国家级城市监测点的任务。肠出血性大肠杆菌０１５７：Ｈ７感染监涮是其中一项。现将监测结果报告如下：肉类标本：郑州农贸市场、市售多种鲜生肉食品，每份采样量为１５０９。有３份熟肉食品（鸡头、鸡肝、鸡肠）由区ＣＤＣ送检。苍蝇标本：郑州农贸市场和农村养殖户捕捉。１．２诊断试剂大肠杆菌０１５７：Ｈ７诊断血清由中国ＣＤＣ传染病所、上海市ＣＤＣ、成都生研所提供。ＥＣ增苗培养基、山梨醇麦康凯琼脂由上海ＣＤＣ提供。免疫磁珠磁板由挪威Ｄｙｍａｌ、Ａ、Ｓ公司生产。０１５７：Ｈ７显色培养基由法国生产，郑州博赛科技有限公司分装销售。微量生化管、药敏琼脂由杭州天和微生物试剂有限公司生产。抗菌药物敏感纸片由北京天坛生物技术开发公司生产。以上所有诊断试剂均在有效期内使用。１．３方法１材料与方法１．１标本来源腹泻病人标本：郑州市所辖综合医院肠道门诊、社区卫生服务站采腹泻病人粪便标本。外环境标本：家畜家禽粪便标本．到郑郊县家畜家禽育种基地和农村个体养殖户采集。增菌：采腹泻病人或家畜家禽动物成型新鲜粪便５ｇ放八ＥＣ增茵瓶内（４０ｍｌ／瓶）。生肉标本：以元菌手续称取２５ｇ并绞碎，放人２２５ｍｌＥＣ作者简介：殷毅峥．副主任技师，研究方向：流行病微生物检验增菌管内。熟肉标本：以无菌棉签反复涂抹体表，面积大于５０ＣＥＩｌ：。作者单位：郑州市疾病预防控制中心。郑州．４５００００４１７６?现代预防医学２００７年第３４卷第２ｌ期ＭｏｄｅｍＰｒｅｖｅｎｔｉｖｅＭｅｄｉｃｉｎｅ．２００７，Ｖｏｌ３４．ＮＯ２将棉签放＾１０ｍｌＥｃ增菌管内。苍蝇标本：以无菌手续在乳钵内碾碎。用一次性吸管反复冲洗后故人１０“ＥＣ增菌管内。２．１腹泻病人太肠轩茵０１５７：Ｈ７捡出结果郑州市从练合医院肠道门诊和社区卫生服务站．采集腹泻病人粪便标本１８５份，检出肠出血性大黼杆苗０１５７：１１７阳性４份。其阳性率为２２％。２．２外环境标本大肠杆茼０１５７：Ｈ７橙出结果郑州市采集外环境标本５８８份．其中家畜家禽动物（牛、羊、猪鸡、鹅、狗、猫）粪便标本４２８份；生肉、熟肉、苍蝇标本１６０份。各类标本中除牛、羊粪便中检出肠出血性大肠杆菌０１５７：Ｈ７阳性２０份。其余标本均未检出肠出血性大肠杆菌０１５７：Ｈ７。其中牛粪阳性率为６．５％（１６／２４８）、羊粪阳性率为１２．１％（４／３３）、家畜家禽总阳性率为４．７％（２０／４２８）。２．３以上所有增菌标本３Ｚ茹，１２－１４ｈ增菌。肠出血性大肠杆菌０１５７：Ｈ７常规检验法、免疫磁珠法（ＩＭｓ）、阳性菌株鉴定方法均按卫生部制定的“肠出血性大脑杆苗０１５７：Ｈ７病例监测方案”中的检验程序进行。生化质控对照菌大肠杆菌ＡＫＣ８０９９。毒力基因检测：由省ＣＤＣ送中国ＣＤＣ传染病所用多重ＰＣＲ方法检测。药物敏感性试验：按ＷＨＯ推荐的纸片琼脂扩散法（Ｋ―Ｂ法）进行质控对照菌为大肠杆菌ＡＴＣＣ２５９２２。系统生化试验２４株待检菌用常规方法进行系统生化试验符合大肠埃希２结果氏菌的主要特征．见表１。裹１试验项目动力生化结果符合率＋２４橡大脑杆菌０１５７：Ｈ７生化结果｛ｘ１０＂２）ＡＴＧＣＳ０９９＋试验项目肌醇生他结果一符合率１０００ｉ１００．０Ａ１１ＣＣ８０９９一１００．０＊《晦ｉ穗≮≮爨；；；ｉ篱穗！鍪褥瓷；｜；｜辚黪凌《豢｜；ｉ誊｜孽｜鼍毫＃晦ｏ甘辫糖＋ｔ毫｜：一一一１０００＋鼠糖一５０．０一诱％哆蕊戆鏊｜氆鬻≮避霉ｌ；套；甏甏ｉｊ《黪甍ｌ警ｊｉ鏊麓瓷。ｊ｛｛¨。山梨醇＋馘镣；一０Ｈ占．．＿＿１锄。０１０００一６７０＋一一瀚棼镶§瀚冁糕黎漆强ｊ穗蘸攀警｜｜ｌ蓍每：？ｔ麦芽柑＋繇纛》一毫？。｜。一氧化酶一。１００．０１０００１００．０１０００一１００．０＋一。警蹶鬣？爨餮镰爨瀵餮；鏊鬣ｊ饕糕簿秀鬣萋毫董木糖＋ＶＰ＂誊。≯ｊ曩一？｜｜≮、ＭＲ＋一９１７＋＋碗虢晦鬻爨赣誊豢鞴餐镰篱ｉｉ饕秘ｊ篱鬟罐赣董？姆誊。嚣薹｜ｉｉ强？ｏ《ｏ０ＮＰＧ＋一曩９５．８１０００＋１０００＋赖酶＋。＋性蕾．卜垮囊鹈嚣馥嚣。瑟瑟魏罨壤；鬻穗露辩溢。嚣赫黪ｊ。锺谨ｉ越％２．４血清学试验２４株待检苗与肠出血性大肠杆菌０１５７诊断血清、Ｈ７诊断血清呈强凝集与盐水对照不凝，与致病性大肠杆菌诊断血清不凝。２．５毒力基因洲定中国ＣＤＣ传染病所用多重ＰＣＲ方法检测４株腹泻病人０１５７：Ｈ７阳性标本。均未检出毒力基因。２０株家畜家禽Ｉ一蛰鼍：薯曩囊｜Ｉ＿■?０１５７：Ｈ７阳性标本中有１７株用多重ＰＣＲ方法检测，检出６株（羊粪４株、牛粪２株）毒力基因：Ｓｔｘ２、ｅａｅＡ、ＨＩｙＡ均为阳性，其余标本皆阴性。２．６药敏试验２４株肠出血性大肠杆菌、质控苗大肠杆菌２５９２２用１６种抗菌药物进行敏感性测定。见表２。裹２２４株０１５７：Ｈ７药敏试验检测结果（ｘｌＯ。《溅｜遂蘩骥攀《甏蒸骥赣ｉ爨邀鞠甏鬻臻萋。毪ｊ：；墼鹇囊嗡瓷饕ｉ甏壤｜瀚罄遵鬻慧饔鞲ｊ溪鬻餐簟蜚诺氟抄星２４１００４２ｔ２ｔ２８３庆大霉素２４１００瓷舔鳞爨罄麓《麓瓷懿遵≮氅ｌ鹗瓷穗撼鬻ｔ黎ｉｉ｛｛『一１新霉素２３９５８１‰镳瞧甏％遵鬻镰鬻每豫｜羲褥鬟攀｜黎酒螓琵誊｜｜．、｜矗置ｊ懑鹁簧曝％鬻罄甏鬻露；篱镳瓷《黎餮毽漆ｌ遵镰警誊臻黪ｊ。ｔｉ｜吡碾酸２１８７５１８３８３现代珂蹄盛学２００７年第３４卷第２１期ＭｏｄｅｍＰｒｅｖｅｎｔｉｖｅＭｅｄｉｃｉｎｅ．２００７，Ｖｄ３４，ＮＯ．２１４１７７（续袁）敏感药物名称中敏蔫瓣ｒ曛慧熏熏嚣爨熏慧翦霹纛藜蒸聚嚣雾瑟蠹雾≯霹露露＿＿＿＿≥、ｉ霹＿氯霉束１９７９．２５２１．８｜甍◇曛篙鬻黉辫鬻鞭露毫镰篱辫鬻薹渗；鬻ｉ瀵罄嚣鏊鬻曩露ｊ四环素１６６６．７ｇ遂塑鎏鍪箧鎏遂鳖鎏鎏遴鍪鋈鎏鎏鋈蓥茎篷箜篁一一：二＿：：＿．．＿＿：＿＿丝二．二．８Ｉ。６。２５３３３．竺３讨论２００５年郑州市承担了４个病种重点肠遭传染病河南省国家级城市监测点的工作，肠出血性大肠杆菌０１５７：Ｈ７的感染监测是其中一项。在省、国家ＣＤＣ统一指导要求下．试剂统一供应，检验结果逐月汇总。２００５年比２００１年肠出血性大肠杆菌感染监测数量大、布点多、标本来源种类广，阳性检出率高。２００５年监测腹泻病人１８５人，男女之比１，７２：１。检出肠出血性大肠杆菌感染患者４人。身女之比为３：１．均为青壮年。未检出０１５７：Ｈ７的毒力基因。监测外环境标本５８８份．其中家畜家禽粪便标本４２８份．检出肠出血性大肠杆菌２０份。在加份阳性标本中有１７份用多重ＰＣＲ方法检出０１５７：Ｈ７毒力基因６份（羊粪４份．牛粪２份）Ｓｔｘ２、ｅａｅＡ、ＨＩｖＡ均为阳性。２００５年郑州市肠出血性大肠杆菌０１５７：Ｈ７总监测量为７７３份．其余各类标本均为阴性。２００１年监测腹泻病人９３份，外环境标本２２７份。小尾寒羊粪便中检出２倒出血性大肠杆菌０１５７：Ｈ７毒力基因ｅａｅＡ、ＨＩｙＡ均为阳性。其余各类标本均未检出０１５７：Ｈ７。脑出血性大肠杆菌０１５７：Ｈ７是一种严重的人畜共患性病原菌．感染患者和无症状携带者可作为传染源。牛、羊、狗、鸡等动物是大肠杆菌０１５７：Ｈ７的天然宿主．有腹泻症状的动物带菌率比较高．动物传染源排菌时间长．往往长期排菌甚至终生排菌．动物作为传染源要比人更重要“】。郑州监测结果表明家畜家禽粪便检出０１５７：Ｈ７阳性率为４．７％．腹泻病人粪便检出率２．２％．且家畜家禽检出０１５７：Ｈ７阳性中携带强毒力基因（Ｓｔｘ２、ｅａｅＡ、ＨＩｙＡ）占３５％．而腹泻病人检出０１５７：Ｈ７阳性标本中未检出毒力基因。郑州市散在发生０１５７：Ｈ７感染的病人和动物疫点的出现．提示要加强对传染源的管理．特别是对动物疫点家畜家禽应圈养，动物舍要经常消毒、清扫。动物粪便应恢无害化处理，肪止污染水源。对确诊病人应观察对症治疗。严防人与人接触传播，杜绝２代病人的发生。药敏试验可作为防治用药的依据．也可反映病原菌的变异情况。为使结果更可靠本文用ＥｃｏｌｉＡＡＴＣＣ２５９２２作质控菌．２４株０１５７：Ｈ７大肠杆苗药敏试验结果显示．头孢唑啉、头孢氮苄、庆大霉索、阿米卡星、诺氟沙星敏感率为１００％。多粘菌素Ｂ、新霉素、痢特灵敏感率均为９５．８％。新生霉索１００％耐药。氨基糖甙类药物对肾脏有损害．尽管耐药力不高也不应使用。在选择抗生索进行治疗时须谨慎ｏ］。肠出血性大肠杆菌０１５７：１ｔ７在国内一些地区相继被检出．其感染和流行范围不断扩大．疫点、疫区不断增多．严重威胁人民健康。新发传染病的到来给医学界的惦床及预防带来新的挑战。在防治工作中应加强相关行业的卫生监测、监督。掌握准确流行病学特征。控制传弛源、加强健康教育的宣传力度，改善不良的生活、卫生习惯，提高群众自我保护意识。警惕脑出血性大肠杆菌０１５７：Ｈ７感染肠类在我市流行和蔓延。参考文献：［１］徐建国．新病原性细菌的世界性和来源问题［Ｊ］．疾病控制杂志，１９９７．（９１）：５－８．［２］李升团，韩光红专题讲座，大肠杆菌０１５７：Ｈ７感染的病原学与流行病学［Ｊ］．解放军预防医学杂志．１９９７，１５（５）．［３］庄菱大肠杆菌０１５７：Ｈ７抗蘸药物敏感性研究［Ｊ］疾病监测，２００１，１６（４）：１２５―１２７【收稿日期：２００７―０４―１６】（上接第４１７４页）映出医疗卫生单位疫情报告不及时、报告意识差．尤其是针对两类传染病的报告意识较差。提示要在全市医疗卫生单位广泛开展新修订《传染病防治法》、《突发公共卫生事件应急条例》的学习、宣传工作，要真正做到早发现、早报告、早隔离、早诊断、早治疗．才能迅速控制疫情。萍乡市位于我国南方．南方一年四季都有流感病例发生。发病高峰在夏季和冬季。该起流感疫情发生在夏季。我们认为本次疫情与医院各诊室、病房等场所长期使用空调．又未加强通风、消毒有关。提示医院不但在冬春季要注意诊疗过程中防范流感等呼吸道传染病．如佩戴纱布口罩、室内通风换气等．在夏季也不能疏忽。本次调查发现所有病例均元流感疫苗接种史．而医务人员是特殊群体，所以医疗卫生机构工作人员，特别是一线工作人员要加强流感疫苗的接种．以增强免疫力或减轻流感症状。此次发生在医院内医务人员的流感疫情属于医院感染，易导致病人发生感染。给医院造成社会形象的损失，从而造成公共卫生意义上的影响。建议所有医院要加强医院感染的监测，特别是传染性痰病的监测．并及早报告，以便采取有针对性的措施，控制医院感染的进一步传播。参考文献：［１］杨绍金，董学平，赵春发．等．湖北省当阳市某中学一起流行性感冒疫情的流行病学调查［Ｊ］．中华流行病学杂志，２００４，２５（１２）：１０９５［２］李小平．一起学校流感暴发的流行病学特征［Ｊ］预防医学情报杂志，２１３０５，２１（２）：１８９―１９０［３］李立明．流行病学［Ｍ］第５版，北京：人民卫生ｍ版杜．２００５．４４３―４４４．ｆ收稿日期：２００７―０６一１２）郑州市肠出血性大肠杆菌O157:H7感染监测作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：殷毅峥， 程春荣， 杨建国， 安戈， 武恩平， 段晶晶， 水艳郑州市疾病预防控制中心,郑州,450000现代预防医学MODERN PREVENTIVE MEDICINE)3次 参考文献(3条) 1.李升团;韩光红 专题讲座,大肠杆菌O157:H7感染的病原学与流行病学 .徐建国 新病原性细菌的世界性和来源问题 1997(91)3.庄菱 大肠杆菌O157:H7抗菌药物敏感性研究[期刊论文]-疾病监测 2001(04) 相似文献(10条)1.期刊论文 金大智.张政.罗芸.程苏云.朱敏.叶菊莲.JIN Da-zhi.ZHANG Zheng.LUO Yun.CHENG Su-yun.ZHU Min.YE Ju-lian 多重实时荧光定量PCR检测肠出血性大肠杆菌O157:H7 -中华微生物学和免疫学杂志)目的 利用多重荧光定量PCR技术,建立一种快速、准确、特异检测肠出血性大肠杆菌O157:H7的定量方法.方法 选取肠出血性大肠杆菌O157:H7编码脂多糖基因(rfbE)和编码鞭毛抗原基因(fliC)作为检测的靶基因,设计引物和TaqMan-MGB探针,探针的5'端分别用FAM和HEX进行荧光标记,3'端标记MGB.优化PCR扩增体系,对多重实时荧光定量PCR方法的特异性、灵敏度、重复性评价,同时进行一定数量临床样本鉴定,与常规方法进行比较.结果 本研究所建立的多重实时荧光定量PCR方法可准确、特异地检测和鉴定肠出血性大肠杆菌O157:H7,能够有效甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7与非H7菌株,其他菌株均无阳性结果;该方法的灵敏度可达到10 CFU/定量检测的批间和批内变异系数均小于5%;对66例临床样本进行评价,结果显示15例肠出血性大肠杆菌O157:H7阳性,2例为肠出血性大肠杆菌O157:非H7阳性,其中16例与常规培养法结果符合,符合率达到98.49%.结论 本研究建立的检测肠出血性大肠杆菌O157:H7多重实时荧光定量PCR方法快速,结果准确、可靠,操作简便,为肠出血性大肠杆菌O157:H7的临床诊断、现场流行病学调查和食品安全监测提供了新的鉴定方法.2.期刊论文 武恩平.刘灵芝.张燕.WU En-ping.LIU Ling-zhi.ZHANG Yan 郑州市2005年肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染状况调查 -现代预防医学)目的:了解郑州市肠出血性大肠杆菌O157∶H7在腹泻病人中的检出情况和宿主动物带菌及毒力基因情况.方法:对采集的宿主动物和腹泻病人粪便及食品应用免疫磁珠富集分离法进行大肠杆菌O157∶H7分离和鉴定.结果:郑州市内共发现3例肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染病例,首次从腹泻病人中检出产毒O157∶H7菌株,采集5种以上动物粪便标本共计475份,从牛粪(247份)中分离到16株O157∶H7,检出率为6.48%,从羊粪(33份)中分离到3株O157∶H7,检出率为9.10%,并检出3株产毒O157∶H7菌株.采集5类市售食品共146份,未分离到O157∶H7.结论:郑州市存在发生肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染暴发或流行的潜在危险.3.期刊论文 孙洋.刘军.冯书章.高丰.郭学军.常国权 肠出血性大肠杆菌O157:H7感染小鼠动物模型的初步建立 -实验动物科学与管理)目的建立肠出血性大肠杆菌O157:H7感染小鼠动物模型.方法选用离乳小鼠随机分组,先以丝裂霉素和萘啶酮酸处理,提高小鼠对肠出血性大肠杆菌O157的敏感性,再分别以不同剂量口服接种肠出血性大肠杆菌O157:H7 EDL933W,进行临床和病理学检查.结果利用对O157不易感的小鼠,复制出人类感染O157所出现的主要病理变化和部分临床症状,初步建立了动物模型.讨论该动物模型对探索肠出血性大肠杆菌O157:H7的感染机制、毒力因子的作用有重要意义,并为O157:H7的疫苗侯选株安全性的评价打下初步基础.4.学位论文 马颖 抗肠出血性大肠杆菌O157：H7志贺样毒素Ⅱ基因工程抗体的实验研究 2006肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7是一种重要的新发人畜共患传染病病原菌。自1975年被首次分离、1982年被确认为致病菌以来的近30年中，世界各地包括中国都有不同规模的暴发流行。EHECO157∶H7感染可使人患腹泻、出血性结肠炎(hemorrhagiccolitis，HC)，还可在5～10％的病例中引发溶血性尿毒综合症(hemolyticuremicsyndrome，HUS)及血栓性血小板减少紫癜(thromboticthrombocytopenicpurpura，TTP)等严重并发症，严重者可导致死亡。EHECO157∶H7的感染因具有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性和抗生素治疗可加剧病情的危险性等特点，已经成为全球性的公共卫生问题。我国已将肠出血性大肠杆菌列为21世纪可能对国人卫生健康有重大影响的12种病原微生物之一。同时，O157∶H7菌培养容易、繁殖迅速、感染力强、感染途径广泛，使之极有可能作为未来军事斗争中的细菌战剂和生物恐怖战剂。美国疾病预防控制中心(CDC)已将EHECO157∶H7菌列为B类生物恐怖病原体严加防范。目前，EHECO157∶H7的全基因组测序已经完成，但对其感染仍缺乏有效的治疗方法。临床上针对O157∶H7菌的感染主要采用抗生素治疗及相应的对症治疗。新近的研究发现，抗生素使菌体破裂，导致O157∶H7菌志贺样毒素(Shigaliketoxin，Stx)的释放水平大大提高，使得抗生素对病程无明显影响甚至导致病程的延长，从而增加发生并发症的危险并引起死亡。人类同感染性疾病作斗争的历史证明，抗体是治疗某些感染性疾病的首选方法。由于O157∶H7菌的感染易引起暴发流行，且对其感染尚缺乏有效的治疗方法，治疗性抗体的研究就显得尤为紧迫。EHECO157∶H7主要产生两种毒素，分别称为志贺样毒素Ⅰ(Stx1)和志贺样毒素Ⅱ(Stx2)。在细菌体内，Stx2为分泌型表达，Stx1为胞内表达。两种毒素均由1个A亚单位和5个B亚单位组成，A亚单位具有细胞内毒性，能与28SrRNA作用从而抑制蛋白质合成，是大肠杆菌O157∶H7引起临床表现的病理基础；B亚单位具有细胞结合特性，能与具有特定糖鞘脂受体(Gb3)的细胞结合，从而引导A亚单位发挥作用，是志贺样毒素致病的关键。多数O157∶H7细菌产生Stx2，而且Stx2毒性强于Stx1，与HUS及TTP等严重并发症的相关性更为密切。因此Stx2是该菌致病性的重要物质基础，是理想的制备中和毒素的特异性抗体的靶抗原。EHECO157∶H7感染致病的机理主要包括两个方面，即在肠道的定植以及产生毒素Stx，Stx可以进入血液循环，引起靶组织器官，如肾小球和结肠内皮细胞的损伤。Stx与其糖鞘脂受体Gb3的特异性结合决定了该毒素的致病性，因此特异性阻止Stx和Gb3受体结合的能中和Stx的抗体可以防止进一步引起病理变化。基于以上认识，本研究从以下几个方面进行治疗性抗肠出血性大肠杆菌O157∶H7志贺样毒素Ⅱ基因工程抗体的实验研究。
1.O157∶H7全毒素及其亚单位抗原的获得方法；按Genbank公布的Stx2核酸序列，根据引物设计原则设计了三对引物，以Stx2cDNA为模板，选择合适的PCR反应条件进行扩增。T-A克隆后构建原核表达质粒，经测序鉴定后转化E.coliBL21(DE3)，IPTG诱导表达。经镍离子亲和层析联合分子筛纯化目的蛋白Stx2A及Stx2B，并经SDS-PAGE、。结果PCR法自O157∶H7菌基因组分别扩增得到stx2(约1240bp)、stx2a(约890bp)及stx2b(约210bp)的基因片段，片段大小与预期相符。原核表达质粒pET11c-stx2、pET11c-stx2a、pET22b(+)-stx2b经酶切及测序鉴定与GenBank公布的序列完全一致。转化E.coliBL21(DE3)后，经IPTG诱导，Stx2、Stx2A及Stx2B蛋白的表达率分别为25％、30％、30％。破菌后SDS-PAGE证实，Stx2A蛋白以包涵体形式表达，Stx2B蛋白以可溶形式表达。纯化后的Stx2A及Stx2B蛋白，纯度＞85％。Stx2A及Stx2B免疫家兔获得了较高效价的多抗血清，双扩效价分别为1∶16和1∶8。重组蛋白Stx2主要以包涵体形式表达，亦有可溶形式表达。可溶形式表达的Stx2具有与Gb3结合活性，CD50约为35pg，对小鼠的LD100为0.010mg；O157∶H7菌超声破菌上清中的Stx2毒素对HeLa细胞的CD50约为50pg，对小鼠的LD100约为0.050mg，结果表明，在总蛋白浓度相同的条件下，重组工程菌pET11c-stx2/BL21超声破菌上清中的Stx2毒素含量高于野生型O157∶H7菌株的Stx2含量，差异极显著，p＜0.01。结论重组蛋白Stx2A及Stx2B具有免疫学活性，可以替代野生型O157∶H7分泌的天然毒素Stx2蛋白，以用作抗原制备抗Stx2的新型的基因工程抗体。可溶形式表达的重组蛋白Stx2具有生物学活性，可用于O157∶H7感染的基础与临床研究。2.鼠抗Stx2亚单位单克隆抗体的制备及生物学功能研究方法；单克隆抗体的制备参照传统杂交瘤技术方法进行，将小鼠骨髓瘤细胞SP2/0与Stx2A(Stx2B-BSA)免疫的Balb/c小鼠的脾脏B淋巴细胞在聚乙二醇(PEG)作用下进行细胞融合，ELISA法筛选出稳定分泌抗Stx2A(Stx2B)单克隆抗体的杂交瘤细胞株。将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔诱生腹水以获得大量单克隆抗体。采用亲和层析法(蛋白A-Sepharose)纯化腹水IgG，并对其类和亚类及轻链型进行鉴定。SDS-PAGE鉴定IgG纯度，ELISA法检测腹水效价，间接ELISA法测定抗体的亲和常数，Westernblot鉴定单克隆抗体特异性及其作用抗原的分子量，通过非标记ELISA相加试验分析单抗所识别的抗原表位。通过检测抗体体外抑制Stx2对HeLa细胞的细胞毒作用和在小鼠体内中和毒素的实验鉴定抗体的生物学功能。结果获得2株能稳定分泌抗Stx2A抗体的单克隆杂交瘤细胞株，5F3和5C11；2株能稳定分泌抗Stx2B抗体的单克隆杂交瘤细胞株1A4和1A5。将4株细胞分别注入小鼠腹腔，均成功诱生大量腹水。腹水IgG抗体经亲和层析法纯化后纯度均达85％以上。杂交瘤单克隆细胞株5F3、5C11、1A4和1A5分泌的单克隆抗体分别属于IgG1、IgG2a、IgG1和IgG1，轻链均为κ型；亲和常数Ka分别为1.7×109、6.3×108、5.7×107和1.9×107。Westernblot结果表明，单抗5F3、5C11、1A4和1A5均能与野生型O157∶H7超声破菌上清中的天然Stx2毒素蛋白特异结合。4株单抗在体外均能中和野生型O157∶H7菌超声上清中的Stx2毒素，从而抑制Stx2对HeLa细胞的细胞毒作用，与无关抗体1D6比较，差异极显著，p＜0.01；同等剂量的抗体，抑制Stx2对HeLa细胞的细胞毒作用的抑制率不同，5F3＞5C11＞1A4＞1A5，差异极显著，p＜0.01；50％抑制率时4株单抗的剂量约为0.1～0.25μg。在动物体内，4株单抗均具有一定的中和活性，对Stx2毒素致死小鼠产生免疫性保护，与1D6对照组比较，小鼠的存活率差异极显著，p＜0.01；同等剂量的抗体，对Stx2毒素致死小鼠的免疫保护作用不同，5F3＞5C11＞1A4＞1A5，小鼠的存活率差异极显著，p＜0.01；0.15mg的抗Stx2A抗体5F3在小鼠体内能中和致死剂量的毒素，对Stx2毒素致死小鼠的免疫保护达80％。结论；4株抗Stx2单抗均具有一定的中和活性，中和活性最强的抗Stx2A单抗5F3可用于构建抗Stx2A单链抗体。
3.抗Stx2A单链抗体的构建及基因结构分析方法；从杂交瘤细胞5F3中提取总RNA，以oligo(dT)15为随机引物，RT-PCR逆转录生成cDNA，然后采用通用的兼并性引物分别扩增抗体轻、重链可变区基因。将抗体轻、重链可变区基因用一编码(Gly4Ser)3短肽的DNA片段连接成5’VH-Linker-VL3’片段，PCR扩增该片段。纯化后的scFv片段与经改造的载体pCANTAB6his相连，转化E.coliTG1。对抗体基因进行测序，采用生物信息学方法对所得序列与现有已报道的其它各种抗体基因进行同源性比较，并分析其胚系基因来源。对由DNA序列推导的氨基酸序列进行分析并通过分子建模分析其二级结构。
4.抗Stx2A单链抗体在体外、体内中和Stx2的实验研究方法；重组子转入E.coliHB2151，构建重组工程菌。经IPTG诱导，收集诱导前后的培养上清液、重组工程菌及超声破菌上清液与沉淀。超声上清液和培养上清液经镍离子亲和层析纯化scFv。经SDS-PAGE、Westemblot等鉴定scFv抗体的纯度和特异性。通过检测抗体体外抑制Stx2对HeLa细胞的细胞毒作用和在小鼠体内中和毒素的活性鉴定抗体的生物学功能。综上所述，，本课题的实施作为本室O157∶H7感染治疗性抗体研究的起步，希望能为这个意义重大的研究课题奠定一定的基础。5.期刊论文 范放.司徒翠华.黄李华.谢昭聪.FAN Fang.SITU Cui-hua.HUANG Li-hua.XIE Zhao-cong 检出山梨醇阳性肠出血性大肠杆菌 O157:H7一例及特征分析 -医学动物防制)目的:肠出血性大肠杆菌O157:H7(entro-hemorrhaguc E Coli O157:H7 or EHEC O157:H7)是具有强致病力的条件致病菌,该菌可通过污染的食物、水、以及直接接触感染的人或动物而感染.加强对该菌的检验,对预防与控制由该菌所致的感染流行十分重要.方法:本文参照中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 方法进行检验.结果:从进口冻猪肚中检出一例EHEC O157:H7,并用PCR方法检测VERO毒素呈阳性.结论:该菌株的生化特征与相关文献报道的EHEC O157:H7生化特征不同的是山梨醇阳性,棉籽糖阴性,检验过程中应慎重鉴别.6.期刊论文 张亚利.郭逸秀.李桂银.李月平.甄素娟.马洪生.陈素良 河北省肠出血性大肠杆菌O157:H7感染监测 -疾病监测)目的为调查河北省既往是否曾发生肠出血性大肠杆菌O157:H7感染疑似病例,了解动物带菌和市售食品、饮水的污染情况.方法选取市级以上医院,查阅日至日的住院病案,对有腹泻史的急性肾功能衰竭患者填写个案调查表.采集各种动物粪便、市售食品和饮水标本,接种山梨醇-麦康凯培养基,可疑菌落转种三糖铁培养基,之后进行生化鉴定和血清学鉴定.结果全省共发现41例肠出血性大肠杆菌O157:H7感染凝似病例,分布于8个市,发病时间无严格季节性.男性29例,女性12例;年龄最小者8天,最大者78岁;农民所占比例最大,占68.3%.全省采集十几种动物粪便标本共计2 060份,从牛粪(751份)中分离到2株O157:H7;采集五类市售食品共3 523份,从生猪肉(366份)中分离到2株O157:H7;采集的饮水标本未分离到O157:H7.结论河北省存在发生肠出血性大肠杆菌O157:H7感染暴发或流行的潜在危险.7.期刊论文 张亚利.郭逸秀.李桂银.李月平.甄素娟.马洪生.陈素良 河北省肠出血性大肠杆菌O157:H7感染监测 -疾病监测)为调查河北省既往是否曾发生肠出血性大肠杆菌O157:H7感染疑似病例,了解动物带菌和市售食品、饮水的污染情况.选取市级以上医院,查阅日至日的住院病案,对有腹泻史的急性肾功能衰竭患者填写个案调查表.采集各种动物粪便、市售食品和饮水标本,接种山梨醇-麦康凯培养基,可疑菌落转种三糖铁培养基,之后进行生化鉴定和血清学鉴定.结果表明,全省共发现41例肠出血性大肠杆菌O157:H7感染疑似病例,分布于8个市,发病时间无严格季节性.男性29例,女性12例;年龄最小者8天,最大者78岁;农民所占比例最大,占68.3%.全省采集十几种动物粪便标本共计2060份,从牛粪(751 份)中分离到2株O157:H7;采集五类市售食品共3 523份,从生猪肉(366份)中分离到2株O157:H7;采集的饮水标本未分离到O157:H7.因此证实河北省存在发生肠出血性大肠杆菌O157:H7感染爆发或流行的潜在危险.8.期刊论文 吴家林.肖勇.凌霞.沙丹.张敬平 肠出血性大肠杆菌O157:H7多重PCR快速检测研究 -现代预防医学)[目的]建立能快速、特异检测肠出血性大肠杆菌O157:H7的多重PCR技术. [方法]选用针对大肠杆菌O157志贺样毒素1、2(sh1/sh2)基因、溶血素(hlyA)基因、和0157特异性基因(rfbE)的4对引物,在同一扩增体系中进行PCR,优化反应体系,测定特异性和灵敏度,并进行了猪肉模拟样品检测. [结果]该方法扩增目的基因片段分别为348,584,250 bp和497 bp,特异性和灵敏度均高.细菌纯培养物的检测灵敏度为103cfu/ml,猪肉模拟样品37℃预增菌4h后检测灵敏度能达到100cfu/ml. [结论]初步建立了快速、灵敏、特异地测定肠出血性大肠杆菌EHEC O157:H7的多重pCR检测技术.9.期刊论文 贾绍春.冯丽.郭宏.JIA Shao-chun.FENG Li.GUO Hong 应用酶联免疫吸附试验检测肠出血性大肠杆菌O157:H7 -免疫学杂志)目的制备和纯化O157:H7抗原,免疫家兔和豚鼠,获得高效价的抗O157:H7免疫血清并进行纯化及酶标记.建立对O157:H7感染患者快速诊断方法,做到早期发现及时治疗,有效控制疫情的蔓延.方法ELISA双抗体夹心法检测O157:H7抗原.步骤:包被特异性抗体,加处理后的粪便等标本,然后加入抗O157:H7酶结合物,最后加入底物显色.结果本课题所研制的抗O157:H7酶结合物只对O157:H7呈阳性反应,而与其他相关细菌无交叉反应.结论应用酶联免疫吸附试验(即包含各类专业文献、外语学习资料、专业论文、文学作品欣赏、行业资料、高等教育、中学教育、35郑州市肠出血性大肠杆菌O157H7感染监测等内容。　
　 金水区肠出血性大肠杆菌O157H7感染性_教学案例/设计_教学研究_教育专区。金水区肠出血性大肠杆菌 O157:H7 感染性 腹泻疫情应急处置技术方案 1 背景 肠出血性... 　 新密市肠出血性大肠杆菌O157H7感染性腹泻应急预案1_解决方案_计划/解决方案_...或既往无疫情地区发现首例确诊病例时,通过网络直报方 式报告郑州市疾病预防控制... 　 多重实时荧光定量PCR检测肠出血性大肠杆菌O157H7(原版)_生物学_自然科学_专业资料。多重实时荧光定量 PCR 检测肠出血性大肠杆菌 O157:H7 Detection and ... 　(enterohemorrhage E.Coli,EHEC)是大肠杆菌的一个亚型,EHEC 分为 157、26、111 血清型,主要致病菌株为 O157∶H7,可引起感染性腹泻,因能引起人 类的出血性... 　肠出血性大肠杆菌(EHEC)感染性腹泻 肠出血性大肠杆菌(EHEC)感染性腹泻是近年来...四、肠出血性大肠杆菌肠炎的防治 O157H7大肠杆菌可引起出血性肠炎、溶血性尿毒... 　肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhage E.Coli,EHEC)是大肠杆菌的一个亚型,EHEC分为157、26、111血清型,主要致病菌株为O157∶H7,可引起感染性腹泻,因能引起人类的... 　 我国快速建立肠出血性大肠杆菌检测法建立了覆盖近 50 种 EHEC 的诊断血清 ...中国 CDC 传染病预防控制所此前已建有一套针对 EHEC-O157H7 的检测和鉴定方法... 　肠出血性大肠杆菌感染临床诊疗工作指引(试行) 试行)【概述 概述】 概述 肠出血...大肠杆菌对上皮细胞的粘附力是许多肠道病 原菌的共同特征。有报道认为O157H7... 　卫生部办公厅关于印发《 卫生部办公厅关于印发《肠出血性大肠杆菌 O104:H4 感染诊疗指导原则(试行) 的通知 感染诊疗指导原则(试行) 》的通知 》卫办医政发〔2011...